ZLB Behring GmbH 
`P.O. Box 1230 
`D 35002 Marburg 
`www.zlbbehring.com 
`  
` 
`
`Memo 
` 
`An/To: 
`B. Vohwinkel 
`S. Schulte 
`G. Seemann 
`
`Von/From: 
`Ernst‐Jürgen Kanzy / Hubert Metzner 
`RES & LCM 
`Tel.: +49 (0)6421 39 2856 / 39 4417 
`Fax: +49 (0)6421 39 4663 
` 
` 
`
` 
` 
`March 30, 2006 
` 
` 
`Berinert P 10‐fold concentrated  (500 U/mL) 
`Feasibility / Stability 
` 
` 
`In  July  2005  research  studies  were  started  evaluating  the  feasibility  of  a  10‐fold 
`concentrated  preparation  of  Berinert  P  (C1‐esterase  Inhibitor,  C1‐Inh),  called  Berinert  P 
`10‐fold in the following. Such a concentrated preparation was considered a prerequisite 
`for  development  of  a  subcutaneous,  prophylactic  home  treatment  of  C1‐Inh  deficient 
`patients. Two studies were performed so far and are summarized in this Memo covering 
`altogether eight different formulations (Exp. no.: B‐050706SB, B‐050718SB, B‐051209AK). 
` 
`Materials and Methods 
`Different  formulations  were  prepared  based  on  the  lyophilisate  of  a  regular  Berinert  P 
`batch  (Lot NF3 62111)  which  was  dissolved,  concentrated  10‐fold  by  ultrafiltration  in  a 
`stirred UF‐cell and transferred into various formulations (table 1) by conventional dialysis. 
`1 mL‐fillings of concentrated C1‐Inh solutions formulated as indicated in table 1 as well as 
`2‐mL‐fillings  of  semi‐concentrated  solutions  (diluted  1:2  with  WFI)  were  freeze‐dried 
`according to SOP 560498‐02: recipe P5‐02 (Berinert P program) in a controlled lab‐scale 
`freeze‐drier. For reconstitution of the lyophilisates 1 mL of WFI was used for each filling 
`size to obtain the 10‐fold concentrated product. 
`Analysis of reconstituted samples as well as of stability samples was performed using C1‐
`Inhibitor  activity  measurement  and  polymer/oligomer  determination  by  size  exclusion 
`chromatography (SEC) and native polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE). 
` 
`
`Page 1 of 16
`
`CSL EXHIBIT 1008
`
`

`

`ZLB Behring GmbH 
`P.O. Box 1230 
`D 35002 Marburg 
`www.zlbbehring.com 
`
`Page: 2
`
`Results 
`Freeze‐dried  product  cakes  of  the  1mL‐fill  sizes  were  more  compact  in  comparison  to 
`those of the 2mL‐fill sizes but on the other hand were more prone to cracking. The residual 
`moisture  of  the  preparations  was  in  the  range  of  0.2%  to  0.7%,  what  is  very  low  in 
`comparison to regular Berinert P (1.84%, mean value of 35 lots). 
`Depending on the formulation, the dissolution times were in the range of 3 to 8 minutes 
`and always resulted in colorless and clear solutions. 
`SEC‐HPLC as well as native PAGE of the reconstituted samples did not show any enhanced 
`aggregate formation of the C1‐Inhibitor due to the concentration or freeze‐drying process, 
`respectively. But certain formulations (2, 4, 6, and 7) showed a tendency for the formation 
`of bands with higher electrophoretic mobility.  
`In general, it can be concluded that a 10‐fold concentration and subsequent freeze‐drying 
`of C1‐Inhibitor is technically feasible. 
`
`Freeze‐dried samples of formulations 1‐8 were subjected to preliminary stability testing by 
`storage of vials at 2°C to 8°C as well as at 40°C for up to 6 months (Exp: no.: B‐050706SB, 
`B‐050718SB). 
`After 6 months of storage at 2°C to 8°C no difference was detectable compared to samples 
`at  the  beginning  of  storage  regarding  the 
`inhibitor  activity  and  regarding  the 
`polymer/oligomer content determined by SEC‐HPLC and PAGE, respectively. 
`However, depending on the formulation different degrees of polymer/oligomer formation 
`were detected by SEC‐HPLC in samples stored at 40°C (figure 1). In addition, the formation 
`of  higher  molecular  weight  bands  was  also  observed  by  PAGE  (figure 2).  The  results 
`suggest  that  higher  concentrations  of  NaCl,  the  presence  of  sucrose  or  an  appropriate 
`combination  of  both  are  favorable  with  regard  to  polymer/oligomer  formation  but  that 
`polymer/oligomer formation under accelerated conditions cannot be avoided completely. 
`No significant loss of activity could be determined upon concurrent testing of the frozen 
`(<‐70°C) stability samples stored for 0, 1, 3, and 6 months at 40°C (figure 3). Due to some 
`inter‐assay variability of the C1‐Inh assay, results of samples tested on time could not be 
`evaluated.  As  a  result  of  the  accelerated  storage  experiment  it  can  be  concluded  that 
`polymer formation up to the levels detected in these samples do not necessarily cause a 
`measurable loss of activity in parallel. 
`
`A  comparative  study  of  freeze‐dried  iso‐osmotic  formulation  #8*  (NaCl‐concentration 
`adapted  to  4.0  g/L)  and  regular  Berinert  P  (Exp.  no.:  B‐051209AK)  showed  increased 
`formation  of  polymers/oligomers  (SEC‐HPLC  and  PAGE)  after  3  months  at  40°C  in  the 
`
`Page 2 of 16
`
`

`

`ZLB Behring GmbH 
`P.O. Box 1230 
`D 35002 Marburg 
`www.zlbbehring.com 
`
`
`Page: 3
`
`increased  formation  of 
`concentrated  formulation  (figure  4  and  5).  Whether  this 
`polymers/oligomers is due to the higher protein concentration and whether these are also 
`formed  in  long‐term  stability  studies  at  2‐8°C  storage  temperature  will  have  to  be 
`evaluated in additional experiments. 
` 
`Iso‐osmotic  formulation  #8*  also  was  stored  as  a  liquid  preparation  at  2‐8°C,  25°C  and 
`35°C for stability testing. After 3 months storage at 35°C an increased polymer/oligomer 
`formation (figure  6 and  7)  accompanied  with a significant  loss  (~70%)  of C1‐Inh  activity 
`(figure 8)  was  detected.  Therefore,  it  is  assumed  that  significant  efforts  and  real  time 
`storage data would be needed for the development of an appropriate liquid formulation. 
` 
`Comparative  pharmacokinetic  studies  in  rabbits  using  10‐fold  concentrated  samples  of 
`freeze‐dried  formulation  #1  and  #8*  and  regular  Berinert  P  were  performed  by 
`PDS/Pharmacology and Toxicology. 
`The results of the first study with formulation #1 and Berinert P as a control (Study no.: 
`PSK 06/05) showed that the courses of the plasma levels versus time were very similar 
`(figure 9). It was concluded that the 10‐fold concentrated formulation and the regular 
`Berinert P are equally well resorbed from the subcutaneous space.  
`The data of the second study (Exp. no. PSK 12/06, formulation #8* versus Berinert P) were 
`statistically analyzed. Both products were absorbed at equal rates from the subcutaneous 
`space (figure 10). The extent of absorption was slightly lower for the new formulation #8*: 
`The average dose‐adjusted AUC of Berinert® P 10‐fold was about 15 % lower than the AUC 
`of the standard formulation. However, this difference of absorption was not statistically 
`significant (p‐value of 0.33) and just may represent the regular variance of the model. It is 
`therefore concluded that the bioavailability of the 10‐fold concentrated product does not 
`differ from present Berinert® P. 
` 
`Conclusions 
`The results of the study demonstrate that 10‐fold concentrated formulations of Berinert P 
`of  500  U/mL  after  reconstitution  can  be  prepared  and  that  reasonably  well  soluble 
`products are obtained. Due to the better appearance of the lyophilisate the 2 mL filling 
`size is currently preferred. Stability of different freeze‐dried formulations up to 6 months 
`under accelerated conditions with regard to C1‐inhibitor activity could be demonstrated. 
`However,  a  certain  increase  of  the  polymer/oligomer  content  was  obtained  for  the 
`concentrated formulations. Whether such polymers/oligomers will also be formed at 2‐8°C 
`upon long‐term storage is not yet known. 
`
`
`
`Page 3 of 16
`
`

`

`ZLB Behring GmbH 
`P.O. Box 1230 
`D 35002 Marburg 
`www.zlbbehring.com 
`
`
`Page: 4
`
` 
`Comparative  studies  on  pharmacokinetics  after  subcutaneous  application  showed  a 
`comparable bioavailability of regular Berinert® P and 10‐fold concentrated formulations. 
` 
` 
` 
` 
`Ernst‐Jürgen Kanzy / Hubert Metzner 
`
`
`
`Page 4 of 16
`
`

`

`ZLB Behring GmbH 
`P.O. Box 1230 
`D 35002 Marburg 
`www.zlbbehring.com 
`  
` 
`
` 
` 
`Table 1: Formulations of 10‐fold concentrated Berinert P 
` 
`
`
`
`
`Formulation
`
`
`
`
`
`
`
`g/L
`NaCl
`
`g/L
`Glycine
`
`g/L
`Na3citrate x 2H2O
`
`g/L
`Histidine
`
`g/L
`Arginine x HCl
`
`g/L
`Sucrose
`
`
`pH
`Calculated osmolality mOsmol/L
`Study no.
`
`
` 
` 
` 
`
`1
`(regular formulation)
`8.5
`10.0
`3.5
`
`
`
`7.0
`470
`
`2
`
`3
`
`4
`
`5
`
`6
`
`7
`
`8
`
`8*
`
`
`8.5
`
`10.0
`10.0
`10.0
`3.5
`
`3.5
`
`10
`
`2.1
`
`
`
`
`
`7.0
`7.0
`7.0
`170
`485
`180
`B-050706SB
`
`3.0
`10.0
`3.5
`
`
`10.0
`7.0
`310
`
`
`
`
`10
`2.1
`50.0
`7.0
`230
`
`
`
`3.5
`
`2.1
`50.0
`7.0
`220
`
`4.0
`3.0
`10.0
`10.0
`3.5
`3.5
`
`
`
`
`
`
`7.0
`7.0
`300
`280
`B-050718SB B-051209AK
`
`Page 5 of 16
`
`

`

`ZLB mm"
`P.0. Box 1230
`D 35002 Mill-'3
`mzlhhdwigm
`
`ZLB Behring
`
`Figure 1:
`
`Accelerated stability study of Berinert P 10—fold, formulations #1 to #8, 2mL—fill sizes;
`content of polymers/oligomers after storage at 40'C determined by SEC-HPLC
`nun—Inn.
`“mom
`nine-c
`sommmsnn-monu-
`
`mmwm
`
`
`
`

`

`ZLB Bailing Gull"
`9.0. Box 1230
`D 35002 Mann-g
`wwwzlbbduirgcom
`
`ZLB Behring
`
`Figure 2:
`
`Accelerated stability study of Berinert P 10—fold, formulations #1 to #8, 2mL-fill sizes;
`protein band patterns (PAGE) after storage for 6 months at 40'C.
`
`lmL/hnL SIM) 5:01:
`
`I
`
`

`

`ZLB Delirium"
`P.0. Box 1230
`D 35002 Marlin
`MIIWCGII
`
`ZLB Behring
`
`Figure 3:
`
`Accelerated stability study of Berinert P 10—fold, formulations #1 to #8, 2mL—fill sizes;
`Cl-lnhibitor activity after storage at 40'C (concurrent analysis of frozen samples at the end of the 6 months storage period).
`
`ml,“
`“mom'-
`film‘“
`A“ ("mill-II»
`
`
`
`WV“)
`
`

`

`ZLB Behring mu
`v.0. Box 1230
`D 35002 Mam-g
`maximum
`
`ZLB Behring
`
`Figure 4.
`
`Comparative stability study of Berinert P 10-fold (formulation #8‘) and regular Berinert P;
`content of polymers/oligamers after storage at 40'C determined by SEC-HPLC
`
`
`
`

`

`ZLBBdl'IuGIIIIH
`P.0. 3011230
`D 35002 Marbug
`MJWM
`
`ZLB Behring
`
`Page: 10
`
`Figure 5:
`
`Comparative stability study of Berinert P 10-fold (formulation 88‘) and regular Berinert P;
`protein band patterns (PAGE) after storage for 3 months at 40'C.
`
`
`
`I.
`
`I234JITIIII
`
`

`

`Accelerated stability study of liquid Berinert P 10‐fold (formulation #8*); 
`content of polymers/oligomers after storage at 2‐8°C, 25°C and 35°C determined by SEC‐HPLC 
`
`Berinert P s.c. 500 IU/mL
`OpNo. B-051205AK-01
`Liquid / Stability
`SEC HPLC TSK 3000 SWXL HMW + Oligomers
`
`2-8
`25
`35
`
`ZLB Behring GmbH 
`P.O. Box 1230 
`D 35002 Marburg 
`www.zlbbehring.com 
`
`
`Page: 11
`
`Figure 6:  
`
`50
`
`40
`
`30
`
`20
`
`10
`
`HMW + Oligomers (%)
`
`0
`
`0
`
`3
`
`6
`
`9
`
`12
`
`15
`
`t (months)
`
`18
`
`21
`
`24
`
`27
`
` 
`
`
`
`Page 11 of 16
`
`

`

`ZLBBell'IuGIIIIH
`PVOV 3011230
`D 35002 Marbug
`mzlbhehliewm
`
`ZLB Behring
`
`Page: 12
`
`Figure 7:
`
`Accelerated stability study of liquid Berinert P 10-fold (formulation #8');
`protein band patterns (PAGE) after storage for 3 months at 2-8'C, 25'C and 35'C
`
`
`
`LII
`
`Illdil‘IIDII
`
`

`

`ZLB aching mu
`to. Box 1230
`I) 35002 Mam-g
`MIMI»!!-
`
`ZLB Behring
`
`Page: 13
`
`Figure 8:
`
`Accelerated stability study of liquid Berinert P 10—fold (formulation #8‘);
`.C_1-_|rahibitetafiivm 9*?! 99986. 4.21329 2539 arid.3_5'_C_(acsi!ity.re_la_t9d_t9serze§eosléipa eoytrelaremasyt Eerinefl E); ___________ _, , '
`mPIn. HIn
`
`
`
`AIWNI
`
`
`

`

`ZLB Benn; Gull"
`P.0. Box 1230
`D 35002 Mann;
`wwwzlbhduilgcom
`
`ZLB Behring
`
`Page: 14
`
`Figure 9:
`
`Study on the pharmacokinetics of Berinert P and Berinert P 10—fold (formulation #1);
`(II-Inhibitor plasma levels (96 of baseline)
`
`+Group I: Berinert P 200 U/kg s.c.
`
`*Group II: Bel-inert P ten fold 200 U/kg s.(.
`
`400
`350
`
`300
`
`250
`
`200
`
`150
`
`100
`
`50
`
`0
`
`
`
`“/0ofBaseline(ClINH)
`
`0
`
`20
`
`40
`
`60
`
`80 100120140160180
`
`Hours
`
`

`

`zm Beh'mg Gull"
`9.0. Box 1230
`D 35002 Mann;
`wwwzlbhdflilgcom
`
`ZLB Behring
`
`Page: 15
`
`Figure 10:
`
`Study on the pharmaookinetia; of Berinert P and Berinert P 10—fold (formulation #8');
`(II-Inhibitor plasma levels (% of norm), dose adjusted
`
`
`
`
`
`n—lelpl: Berinnl’zoo [Mtg 54'.
`
`w-Glm ll: Belimnl’ tenfold 200 Ulkg s.c.
`
` 0
`
`20
`
`40
`
`60
`
`80
`
`100
`
`120
`
`140
`
`160
`
`180
`
`Homs
`
`

`

`From:
`
`To:
`Cc:
`Subject:
`Date:
`Attachments:
`
`IMCEAEX- O=CSL OU=EUADMINGRP CN=RECIPIENTS CN=ERNST-
`JUERGEN+2EKANZY@eurprd04.prod.outlook.com
`Bernhard.Vohwinkel@zlbbehring.com; Stefan.Schulte@cslbehring.com; Gerhard.Seemann@cslbehring.com
`Hubert.Metzner@cslbehring.com
`Memo: Berinert 10-fold; Feasibility/Stability
`Friday, March 31, 2006 2:39:59 AM
`Memo 060330.doc
`
`Hallo zusammen,
`
`in der Anlage das Memo zu Berinert 10-fold concentratet, in dem die bisherigen Ergebnisse zur
`technischen Machbarkeit und Stabilität zusammengefasst sind.
`
`
`
`Beste Grüße
`
`Ernst-Jürgen Kanzy
`
`
`
`Page 16 of 16
`
`