EXHIBIT 2026
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`EXHIBIT 2026
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`xP008060268
`XP008060268 XP008060268
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`KCICFCCICCS KCICFCCICCS
`t(ctctGlCGS
`Gilpin, R. K.l Eurkq M. F.: Anrrl. (lhcm. 45, llES l197-11
`
`I Gilpin, R. K.; Burke, M. F.: Anal. Chem. 45, 1383 (1973) I Gilpin, R. K.; Burke, M. F.: Anal. Chem. 45, 1383 (1973)
`Dorsr:yl I.O.; Dill. K. A.: Chcm, Rcv. t9. ltl llgEgl
`
`2 Dorsey; J. C.; Dill, K. A.: Chem. Rev. 89, 331 (1989) 2 Dorsey; J. C.; Dill, K. A.: Chem. Rev. 89, 331 (1989)
`Eiscnbci0, F.: Bcr" Bunsangw. Phys, Chcil.9t. l019 (19891
`
`3 Eisenbei13, F.: Ber. Bunsenges. Phys. Chem. 93. 1019 (1989) 3 Eisenbei13, F.: Ber. Bunsenges. Phys. Chem. 93. 1019 (1989)
`Mortctn. C.: Low, M. J, D.: J. Cotrrl. t8. 265 (l97ll
`
`4 Morterra, C.: Low. M. J. D.: J. Catal. 28. 265 (1973) 4 Morterra, C.: Low. M. J. D.: J. Catal. 28. 265 (1973)
`Wuksmundrii, A.; Rurjzinrki, W.: Supr!nowirz. Zl Lcbodn. R':L Chroma'
`
`5 Wuksmundzki, A.; Rudzinski, W.; Suprynowiex. Z.; Leboda, R.:1. Chroma-5 Wuksmundzki, A.; Rudzinski, W.; Suprynowiex. Z.; Leboda, R.:1. Chroma-
`lo8r. 92.9 (19?4f
`
`mgr. 92.9 (1974) mgr. 92.9 (1974)
`iiirg.t. B.'L.: Lc Foge. J. N.l Tunnkrr. N.: in: Horvsth' Cs'l lEd'l:
`
`6 Karger, B. L.: Le Page. J. N.; Tanaka. N.: in: Horvath. Cs.; (Ed.): 6 Karger, B. L.: Le Page. J. N.; Tanaka. N.: in: Horvath. Cs.; (Ed.):
`Higfr'- Pcrformuncc l,iq Jid Clt romu togrl phy, Ad voncci nnd Pcnlrcti vc's'
`
`High-Performance Liquid Chromatography, Advances and Perspectives, High-Performance Liquid Chromatography, Advances and Perspectives,
`Vot, t. S. tJ9. Acndcrnic Prcsr Ncw Yort l9H0
`
`Vol. 1. S. 159. Academic Press, New York 1980 Vol. 1. S. 159. Academic Press, New York 1980
`Nulum. A.l Horvoth, C.: J. Chromutogr. 203. 53 ll9Bl)
`
`7 Nukum, A.; Horvuth, C.: J. Chromutogr. 203. 53 (1981) 7 Nukum, A.; Horvuth, C.: J. Chromutogr. 203. 53 (1981)
`K0hlcr, I.; Klrklnod. J. I.: Chromnlogr' !85. 125 ll98?l
`
`K Uhler, J.; Kirkland, J. J.: Chromatogr. 385, 125 (1987) K Uhler, J.; Kirkland, J. J.: Chromatogr. 385, 125 (1987)
`l
`
`9 Kaler, J.; Chase. D. D.; Far(ee, R. D.; Vega, A. J.; Kirkland. J. J.: J. 9 Kaler, J.; Chase. D. D.; Far(ee, R. D.; Vega, A. J.; Kirkland. J. J.: J.
`Kohlcr. J.l Chusc. D. B.; Forlcc, R'-D.i vcBtl. A' J,; Kirktrrnd' J'
`J.
`I
`Chromatogr. 352" !75 (19$6)
`
`Chromatogr. 352, 275 (1986) Chromatogr. 352, 275 (1986)
`Ungcr. K. i.: Porous Silicn. Journnl of Chromltogrnphy Librnrl' Vol'
`t6.
`
`10 Unger, K. K.: Porous Silica. Journal of Chromatography Library. Vol. 16, 10 Unger, K. K.: Porous Silica. Journal of Chromatography Library. Vol. 16,
`t0
`
`Elsevier. Amsterdam 1979 Elsevier. Amsterdam 1979
`Elscvicr. Amstcrd.m | 979
`tl
`F0rid.rii. B.l Alucrr. K.: Bnycr. E.: J. Clrromrtogr' 506, 341 t1990)
`
`I I Pfleiderer, B.; Albert. K.: Bayer. E.: J. Chromatogr. 506. 343 11990) I I Pfleiderer, B.; Albert. K.: Bayer. E.: J. Chromatogr. 506. 343 11990)
`Sinstlorf, b. W.; Mtciel. C' E.: J. Am' Chcnr. Soc. t05, l4B7 (lgEll
`
`12 Sindorf D. W.; Maciel, G. E.: J. Am. Chem. Soc. 105, 1487 (1983) 12 Sindorf D. W.; Maciel, G. E.: J. Am. Chem. Soc. 105, 1487 (1983)
`l2
`Sindorf. D. W.; Mtr:icl' C. E.: J. Am. Cltcm. Soc l0-1, 4!63 (l9lll)
`rl
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`13 Sindorf, a W.; Maciel. G. E.: J. Am. Chem. Soc. 103, 4263 (1981) 13 Sindorf, a W.; Maciel. G. E.: J. Am. Chem. Soc. 103, 4263 (1981)
`Bnyer. ti.: Albcrt. K.; Reincrs. J.: Nicdcr, M.: Milllcr. D': J' Chromotogr'
`
`(cid:9) K.; Reiners. J.; Nieder, M.: Milner, D.: J. Chromatogr. (cid:9) K.; Reiners. J.; Nieder, M.: Milner, D.: J. Chromatogr.
`
`14 Bayer. ti.: 14 Bayer. ti.:
`l4
`
`24, 24,
`26{. t97 (t983)
`
` 197 197
`Szlbo, K,l lr Hu. N.: Schneidcr. P.; Zsllncr' P.: Kovuls, E: Hclv' Chim'
`
`15 Szabo, K,; Le Hit, N.: Schneider, P.; Zeltner, P.; ((ovals, E.: Hely. Chin. 15 Szabo, K,; Le Hit, N.: Schneider, P.; Zeltner, P.; ((ovals, E.: Hely. Chin.
`t5
`
`Ada 67, 2128 (1984) Ada 67, 2128 (1984)
`Acrn 6?.2128 t1984)
`Buysr,
`
`16 Hetem. M.; van de Ven. L.: de Haan. J.; Cramers, C.: Albert, K.: Buyer, 16 Hetem. M.; van de Ven. L.: de Haan. J.; Cramers, C.: Albert, K.: Buyer,
`H.t.m. trt.: tun de Vcn, L.: de Hntrn. J.; Cramers. C.l
`t6
`
`E.: J. Chromatogr. 479, 269 (1989) E.: J. Chromatogr. 479, 269 (1989)
`E.: J. Chrom8logr.479.269 (19E9|
`Kinkcl. J. N.i Ungcr. K. K.; J' Chromotogr. 3t6, l9l (19E4)
`
`17 Kinkel. J. N.; Unger, K. K.: J. Chromatogr. 316, 193 (1984) 17 Kinkel. J. N.; Unger, K. K.: J. Chromatogr. 316, 193 (1984)
`l7
`Sokolowski. A.: Wrrhlund, K'-G.: J. Chtomillogr. t89' 299 (1980)
`
`18 Sokolowski, A.: Wahlund, K.-G.: J. Chromatugr, 189, 299 (1930) 18 Sokolowski, A.: Wahlund, K.-G.: J. Chromatugr, 189, 299 (1930)
`IE
`ljrcytat, w. E.l Strrp{, W.: Phnrm. Zrg. Wiss. 6./t38, l:6 (1993)
`
`19 Freytag, W. E.: St apt, W.: Pharm. Zig. Wiss. 6./138, 126 (1993) 19 Freytag, W. E.: St apt, W.: Pharm. Zig. Wiss. 6./138, 126 (1993)
`l9
`
`20 Fulde, G.: Dissertation Marburg 1993 20 Fulde, G.: Dissertation Marburg 1993
`Fuldc, O.: Dissertirtion Marburg 199'l
`20
`Jones- R. R.: Hrrrkradcr. R' J.:Sorithord. G. L.: J' Not. Prod. 49' I tO9 ( 1986t
`
`21 Jones, R. R.; Harkrader, R. J.:Southard. G. L.: J. Nat. Prod. 49.1109 (1986) 21 Jones, R. R.; Harkrader, R. J.:Southard. G. L.: J. Nat. Prod. 49.1109 (1986)
`2l
`Bcrthold. A: J. Chromatogr' 549. | (1991)
`'t1
`
`22 Berthold, A.: J. Chromatogr. 549, 1 (1991) 22 Berthold, A.: J. Chromatogr. 549, 1 (1991)
`u;;;, K. K.: Porous Silici. Journllof Chromatogruphy. Librory' Vol' t6'
`
`23 Unger, K. K.: Porous Silica. Journal of Chromatography, Library. Vut. 16, 23 Unger, K. K.: Porous Silica. Journal of Chromatography, Library. Vut. 16,
`23
`S, 102. Elscvicr. Atos(ctdilnr lrr79
`
`S. 102, Elsevier, Amsterdam 1979 S. 102, Elsevier, Amsterdam 1979
`!4 Ssndcr. L. C.l Wisc. S. A.: Anul. Chcnt. 5(r, 5(X (19641
`
`24 Sunder, L. C.; Wise, S. A.: Anal. Chem. 56, 504 (1984) 24 Sunder, L. C.; Wise, S. A.: Anal. Chem. 56, 504 (1984)
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`I 2l4 5 6
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`7l
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`3
`colum$ wttt Scpt locnllcol. Clucnl: A: v.u) M l\nrrr'r.. Pll 3 zJ ltllrv.ti
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`columns were kept tommcat. c.tuent: u.0 M Kr1rru4. pm ®t.) trs 3rv41; columns were kept tommcat. c.tuent: u.0 M Kr1rru4. pm ®t.) trs 3rv41;
`B: Cll.OH Gr:rdient llinelrl: 0- J5 min from 90o/o A to 55% A, l5- 40 min to
`
`13: CHIOH Gradient (linear): 0- 35 min from 90% A to 55% A, 35 -40 min to 13: CHIOH Gradient (linear): 0- 35 min from 90% A to 55% A, 35 -40 min to
`4O./r A':,;O-d)min ro 40% A;60-?Omin lo !5% A, ?0 t0min to 200/r A.
`
`40% A; 40-60 min to 40% A; 60-70 min to 25% A. 70 80 min to 20% A. 40% A; 40-60 min to 40% A; 60-70 min to 25% A. 70 80 min to 20% A.
`Flor rotc: O.7 nrl,'min. Tempcraturc: lf not olhcrwisc stcoted lhc cxpcrimen6
`
`Flow rote: 0.7 mitmin. Temperature: If not otherwise dented the experiments Flow rote: 0.7 mitmin. Temperature: If not otherwise dented the experiments
`nnen rcrfotmrd sll toonr lcmpcroautc. Othca rcleclrd lemparrturcs havc bccn
`
`were performed at room temperature. Other selected temperatures have been were performed at room temperature. Other selected temperatures have been
`udjusicd by u column lhcrmoslrl. Samplc volumc: 20 yl. Absorbunct: 2E5 nm'
`
`adjusted by is column thermostat. Sample volume: 20 pl. Absorbance: 285 nm. adjusted by is column thermostat. Sample volume: 20 pl. Absorbance: 285 nm.
`HPLC systenr: (irrdicnt systcm 600 E (Fu. Milliporc WotcnL diodcmrrsy
`
`HPLC system: Gradient system 600 E (Fa. Millipore Waters), dindcaarray HPLC system: Gradient system 600 E (Fa. Millipore Waters), dindcaarray
`dcterror 990 (hlt. Milliporc Wrtlcrtl. HPLC.column thcirnostilt 5-ES "C (hrs.
`
`detector 990 (Fu. Millipore Waters). H PLC-column thermostat 5-85 "C (Fe. detector 990 (Fu. Millipore Waters). H PLC-column thermostat 5-85 "C (Fe.
`
`Knauer). Knauer).
`Knnucrl.
`
`J,3.t, PcnA iilcntiliutrhn
`
`J.2.2. Peak idenlificalloa J.2.2. Peak idenlificalloa
`Rctcntion linnq lnd tlV-spcctru uf rcfcrcncl suh*lancts hnvc bcett rrscd ttt
`
`Retention times und UV-spectru of reference substances have been used to Retention times und UV-spectru of reference substances have been used to
`idchrify the pcuks in lhr chronriltoSrlms. Thc diflcrcnl rcfetsnce rubstoncls
`
`identify the peeks in the chromatograms. The different reference substances identify the peeks in the chromatograms. The different reference substances
`havc bccn chcckcd by lH- un,J rrC-NMR-spcoroscopy.
`
`have been checked by 1H- and 13C-NMR-spectroscopy. have been checked by 1H- and 13C-NMR-spectroscopy.
`
`3.3. Solid phttsc NM R spcctroscopy
`
`3.3. Solid phase NM ft spectroscopy 3.3. Solid phase NM ft spectroscopy
`NMR.[lnit: Erukcr AMX lfi) rvith n CP-MAS Unit.
`
`NMR.Unit: Bruker AMX 300 with a CP-MAS Unit. NMR.Unit: Bruker AMX 300 with a CP-MAS Unit.
`
`J.J,r.,esi-Cr-/r't As-N M R
`
`J.3.1: "Si-CP-AIAS•IVAIR J.3.1: "Si-CP-AIAS•IVAIR
`Miiuuring frcqucncy: 59.63 MHz Proton resonancc: J00.14 MHz. Optimal
`
`Measuring frequency: 59.63 MHz. Proton resonance: 300.14 MHz. Optimal Measuring frequency: 59.63 MHz. Proton resonance: 300.14 MHz. Optimal
`cootuct-limc: 2o0fi)pscc for LiChrosphcr 60 RP'selcct B. 5000 pscc for
`
`contact-time: 20000 µsee for LiChrospher 60 RP-select B. 5000 pace for contact-time: 20000 µsee for LiChrospher 60 RP-select B. 5000 pace for
`Nudcoril l(x) 4ts.
`
`Nudeosil 100 AB. Nudeosil 100 AB.
`
`J 3.1. t t C-C' I'. M AS. N nt R
`
`' 3C-CP-MAS-AritIR ' 3C-CP-MAS-AritIR
`Milruring frequcncy: 75.4!t MHz. Prolon rcsonancc: l(U'14 MHz Optimul
`
`Measuring frequency: 75.48 MHz. Proton resonance: 300.14 MHz. Optimal Measuring frequency: 75.48 MHz. Proton resonance: 300.14 MHz. Optimal
`contest-linE: 2UnFscc for Nucleosil 100 AB. 2m0 gscc for LiChrosphcr 6O
`
`contact-linty: 2000 µsec for Nucleosil 100 AB, 2000 pee for LiChrospher 60 contact-linty: 2000 µsec for Nucleosil 100 AB, 2000 pee for LiChrospher 60
`RP.sclect 11.2000 prec lor Eurosphar lfl).
`
`RP-select B, 2000 pee for Eurospher 100. RP-select B, 2000 pee for Eurospher 100.
`
`Acknowledgument: We urc most grulcful to ou( collcf,guc Mr. Lubda (Fa.
`
`Acknowledgement: We are most grateful to our colleague Mr. Lubda (Fn. Acknowledgement: We are most grateful to our colleague Mr. Lubda (Fn.
`Mcrlk) for running thc CP-MAS-NMR spcctra.
`
`Merck) for running the CP-MAS-NMR spectra. Merck) for running the CP-MAS-NMR spectra.
`
`Reccived Jonu&rY 27' 1994
`
`Received January 27. 1994 Received January 27. 1994
`Aecplsd Msrch 20, 1994
`
`Accepted March 20, 1994 Accepted March 20, 1994
`
`Dr. Hnnns Htbcrlcin
`
`Dr. Harms Hiberlein Dr. Harms Hiberlein
`lnsritut f0r Phlrfiroa:utischc Biologic
`
`Institut fur PharAtazeutische Biologie Institut fur PharAtazeutische Biologie
`dcr Philipps-Univetsltfi I Morbur8
`
`der Philipps-Universitfit Marburg der Philipps-Universitfit Marburg
`DeuBchha uastra0e | 7 r,'r
`
`Deutschha nest rade 17'/, Deutschha nest rade 17'/,
`D-35037 Merburg
`
`D-35037 Marburg D-35037 Marburg
`
`des Klinikums dEr Johannes Gutenberg-
`
`Apotheke', III. Medizinische Klinik und Poliklinik Abteilung Hamatologie2, des Klinikums der Johannes Gutenberg-Apotheke', III. Medizinische Klinik und Poliklinik Abteilung Hamatologie2, des Klinikums der Johannes Gutenberg-
`Apotheke!, lll. Medizinische Klinik und Poliklinik Abteilung Himatologie',
`Universit6t, Mainz
`
`Universitat, Mainz Universitat, Mainz
`I nfusionslosungen
`Stabilitdt von Bendamustinhydrochlorid in
`
`Stabilitat von Bendamustinhydrochlorid in Infusionslosungen Stabilitat von Bendamustinhydrochlorid in Infusionslosungen
`BIRGIT MAAS', C. HUBER3 und IRENE KRAMER' BIRGIT MAAS', C. HUBER3 und IRENE KRAMER'
`
`BIRGIT MAASI, C. HUBER, Und IRENE KRAMER1
`
`Bendamustinhydrochlorid wurde mittcls Revcrsed Pha-
`
`Bendamustinhydrochlorid wurde mittels Reversed Pha-Bendamustinhydrochlorid wurde mittels Reversed Pha-
`se HPLC bestimmt. Die chemische Stabilitlt (tno) des
`
`se HPLC bestimmt. Die chemische Stabilitiit (t„) des se HPLC bestimmt. Die chemische Stabilitiit (t„) des
`Zytostatikums (0,25 mg/ml)betrrigt in 0'9% Kochsalz'
`
`Zytostatikums (0,25 mg/m1) betriigt in 0,9% Kochsalz-Zytostatikums (0,25 mg/m1) betriigt in 0,9% Kochsalz-
`l6lung bei 4'C 120 h und bei 23 "Ct h.Stabilitiitsbeein'
`
`lOsung bei 4 "C 120 h und bei 23 "C 9 h. Stabilitiitsbeein-lOsung bei 4 "C 120 h und bei 23 "C 9 h. Stabilitiitsbeein-
`flusscnde Faktoren sind pH'Wert, Temperatur und
`
`flussende Faktoren sind pH-Wert, Temperatur und flussende Faktoren sind pH-Wert, Temperatur und
`Chloridioncnkonzentration. Kochsald6sung 0,97o ist
`
`Chloridionenkonzentration. Kochsalzlosung 0,9% ist Chloridionenkonzentration. Kochsalzlosung 0,9% ist
`nls Triigerlilsung 16r tsendamustin-lnfusionslcisungen
`
`als Triigerlosung fur Bendamustin-InfusionslOsungen als Triigerlosung fur Bendamustin-InfusionslOsungen
`einzusetzen. Die Stobilit{rEzeitriiume gewiihrleisten cine
`
`einzusetzen. Die Stabilitiitszeitraume gewahrleisten cine einzusetzen. Die Stabilitiitszeitraume gewahrleisten cine
`unproblematische Aufbewahrung und Applikation in
`
`unproblematische Aufbewahrung und Applikation in unproblematische Aufbewahrung und Applikation in
`
`der klinischen Praxis. der klinischen Praxis.
`der.klinischen Praxis.
`
`
`Stability of bendamustinc hydrochloride in infusions Stability of bendamustinc hydrochloride in infusions
`Strbillty of bendamustinc hydrochloridc in infusions
`Thc stubility of bcndamustinc hydrochloridc (0.25 mg/
`
`The stability of bendamustinc hydrochloride (0,25 mg/ The stability of bendamustinc hydrochloride (0,25 mg/
`mt) in 0.9% sodiunr chloride wfls studied sfter storage
`
`ml) in 0.9% sodium chloride was studied after storage ml) in 0.9% sodium chloride was studied after storage
`ut 4 "C and 23 oC using Reversed Phase HPLC. Bend'
`
`at 4 "C and 23 'C using Reversed Phase HPLC. Bend-at 4 "C and 23 'C using Reversed Phase HPLC. Bend-
`anlustinhydrochloride is stable al 4'C for 120 h and nt
`
`am ustinhydrochloride is stable at 4 °C for 120 h and at am ustinhydrochloride is stable at 4 °C for 120 h and at
`23 "C lorg h. Tempersture. pH and chloride concentra'
`
`23 °C for 9 h. Temperature, pH and chloride concentra-23 °C for 9 h. Temperature, pH and chloride concentra-
`lion nrc intportunt fttctors which influence stubility'
`
`tion are important factors which influence stability. tion are important factors which influence stability.
`Isotonic sodium chloride must be tlsed for tlrc prepa'
`
`Isotonic sodium chloride must be used for the prepa-Isotonic sodium chloride must be used for the prepa-
`
`ration of bendamustinc hydrochloride infusions. ration of bendamustinc hydrochloride infusions.
`rution of bendamustinc hydrochloridc inl'usions.
`
`l. Elnicltung
`
`1. Einicitung 1. Einicitung
`
`Bendamustin (Ribomustin°,', 445- Bis(2-chlorethypamino)-Bendamustin (Ribomustin°,', 445- Bis(2-chlorethypamino)-
`Bendunrustirr (Ribomutlln'r'. 4-[5-Bis(2'chlorbthyl)amino]'
`l -mcthyt-2-benzimidazolylbutunsiiure) ist cin wirksamos Chc'
`
`1-methy1-2-benzimidazotylbutansiitire) ist cin wirksames Che- 1-methy1-2-benzimidazotylbutansiitire) ist cin wirksames Che-
`
`Pharmazie 49 (1994), H. 10 Pharmazie 49 (1994), H. 10
`
`Pharmazie 49 {1994), H.'10
`
`motherapeutikum in dcr Behondlung maligner Erkrankungen'
`
`motherapeutikum in der Behandlung maligner Erkrankungen. motherapeutikum in der Behandlung maligner Erkrankungen.
`Dic Stabilitlt der lyophilisiertcn TrockensubstBnz ist bereits
`
`Die Stabilitat der lyophilisierten Trockensubstanz ist bereits Die Stabilitat der lyophilisierten Trockensubstanz ist bereits
`bekirnnt []. Im Rnlimen von Untersuchungcn zur Pharmako-
`
`bekimnt [1]. Im Rahmen von Untersuchungen zur Pharmako-bekimnt [1]. Im Rahmen von Untersuchungen zur Pharmako-
`kinetik von Bendamustin am Menschen wurden auch itt vitro'
`
`kinetik von Bendamustin am Menschen wurden auch in vitro-kinetik von Bendamustin am Menschen wurden auch in vitro-
`Mcssungen zur Stabilitfit der g,el6sten Substsnz bei einer
`
`Messungen zur Stabilitiit der gelosten Substnnz bei ciner Messungen zur Stabilitiit der gelosten Substnnz bei ciner
`Temperitur von 37'C in gepuffertem Mediunt (pH :-1'li
`
`Temperatur von 37'C in gepuffertem Medium (pH = 7,5; Temperatur von 37'C in gepuffertem Medium (pH = 7,5;
`tso = 6,2 min) und in heparinisicrt€m Plasma.(leo = t'-6Jtt)
`
`t30 = 6,2 min) und in heparinisiertem Plasma (t,0 = 1,67 11) t30 = 6,2 min) und in heparinisiertem Plasma (t,0 = 1,67 11)
`diirctrgetiihrt [2]. Es fchlen aber bislang Angaben zur Halt-
`
`durchgefiihrt (2]. Es fchlen aber bislang Angaben zur Halt-durchgefiihrt (2]. Es fchlen aber bislang Angaben zur Halt-
`barkeii vorr'binclarnustin-lnfusionsl6sttng€n. Da die Her-
`
`barkeit von Bendamustin-Infusionslosungen. Da die Her-barkeit von Bendamustin-Infusionslosungen. Da die Her-
`stellung paticntenbezo gcncr. applikationsfcrtigcr Zytostatika'
`
`stellung patientenbezogener, applikationsfertigcr Zytostatika-stellung patientenbezogener, applikationsfertigcr Zytostatika-
`Iniekti6ns- oder -lnfusionsl6su ngen immcr hiiufigcr du rch einc
`
`Injektions- oder -InfusionslOsungen immer haufiger du rch eine Injektions- oder -InfusionslOsungen immer haufiger du rch eine
`
`zentrale Zytostatikazubereitung in der Krankenhausapotheke zentrale Zytostatikazubereitung in der Krankenhausapotheke
`zentrale Zytostatikazubereitung in der Krnnkcnhausapothekc
`erfolgt und die lnfusion nicht mehr unmittelbar Yor ihrer
`
`erfolgt und die Infusion niche mehr unmittelbar vor ihrer erfolgt und die Infusion niche mehr unmittelbar vor ihrer
`nppiikation ,zubereitct wird, sind Kcnntnis-se zur Stabilitdt
`
`Applikation ,zubereitet wird, sind Kenntnisse zur Stabilittit Applikation ,zubereitet wird, sind Kenntnisse zur Stabilittit
`von Bendarnustinhydroclrtorid in wii0riger Ldsung erforder'
`
`von Bendamustinhydrochlorid in wiiBriger Losung erforder-von Bendamustinhydrochlorid in wiiBriger Losung erforder-
`
`lich [3]. lich [3].
`lich [31.
`
`2. Untersuchung€n und Ergebnisse
`
`2. Untersuchungen und Ergebnisse 2. Untersuchungen und Ergebnisse
`Bcndamustinhydrochlorid ist in wflBriger Losung sehr in'
`
`Bendamustinhydrochlorid ist in waBriger Ltisting sehr in-Bendamustinhydrochlorid ist in waBriger Ltisting sehr in-
`slabil. ln schwich saurer, neutralcr sowic alkulischer Ldsung
`
`stabil. In schwach saurer, neutraler sowic alkalischer LOsung stabil. In schwach saurer, neutraler sowic alkalischer LOsung
`irtorlt einc Hydrotyse dsr Bis'2-Cblorctylsminofunktion'
`
`erfolgt einc Hydrolyse der Bis-2-Chloretylaminofunktion. erfolgt einc Hydrolyse der Bis-2-Chloretylaminofunktion.
`vcrmutlich
`And-og der Hydrolyse von Mclphslan -Gntsteht
`
`Analog der Hydrolyse von Melphalan entsteht vermutlich Analog der Hydrolyse von Melphalan entsteht vermutlich
`iiber ein Azi ricliu m-ka$on zu ntichst das Monohydror ybend'
`
`Ober ein Aziridium-Kation zuntichst das Monohydroxybend-Ober ein Aziridium-Kation zuntichst das Monohydroxybend-
`
`amustin und nachfolgend das Dihydroxyderivat (Schema) (41 amustin und nachfolgend das Dihydroxyderivat (Schema) (41
`emustin und nachfolgend das Dihydroxyderivat {Schema) [4]'
`tn stark saurer Ltisung wird die Hydrolyse durch Proto'
`
`In stark saurer Losung wird die Hydrolyse dutch Proto- In stark saurer Losung wird die Hydrolyse dutch Proto-
`775 775
`
`775
`
`-
`
`0001
`
`CEPHALON, INC. -- EXHIBIT 2026 0001
`
`

`
`!-
`
`nicrunr des freicn Elcktronenpaal'es Im Sticksto[I ersclrwert'
`
`nicrung des freien Elektronenpaares am Stickstoff erschwert. nicrung des freien Elektronenpaares am Stickstoff erschwert.
`Ncben dcm pH'Wert hat die Chloridionenkonzentration
`
`Neben dem pH-Wert hat die Chloridionenkonzentration Neben dem pH-Wert hat die Chloridionenkonzentration
`cincn wescntlichen EinflulJ auf dic Lagc des Hydrolysegleich'
`
`einen wesentlichen EinfluB auf die Lagc des Hydrolysegleich-einen wesentlichen EinfluB auf die Lagc des Hydrolysegleich-
`cewichtcs. Mit stcigcnder Chloridionettkonzentratiott solltc
`
`gewichtes. Mit steigender Chloridionenkonzentration sollte gewichtes. Mit steigender Chloridionenkonzentration sollte
`Lcvorzugt die Rcgeneration dcs Bendamustinhydrochlorids
`
`bcvorzugt die Regeneration des Bendamustinhydrochlorids bcvorzugt die Regeneration des Bendamustinhydrochlorids
`crfolgcn, wodurch die Bildung dcs Hydroxyderivatcs zuriick'
`
`erfolgen, wodurch die Bildung des Hydroxyderivatcs zurikk-erfolgen, wodurch die Bildung des Hydroxyderivatcs zurikk-
`gedriingt wird. Fiir Melphalan ist _rJie Abhiingigkeit des
`
`gedriingt wird. Far Melphalan ist die Abhangigkeit des gedriingt wird. Far Melphalan ist die Abhangigkeit des
`Hydrolyscgteichgewichtcs von der Chloridionenkonzcnlra-
`
`Hydrolysegleichgewichtcs von der Chloridionenkonzentra-Hydrolysegleichgewichtcs von der Chloridionenkonzentra-
`rion [5] und dcr Temperatur dokumentiert [41. ln Kcntrlnis
`
`tion [5] und der Temperatur dokumentiert [4]. In Kenntnis tion [5] und der Temperatur dokumentiert [4]. In Kenntnis
`dieser Zusammcnhiinge fiir dns strukturverwBndtc Mslphalun
`
`dieser Zusammenhange fiir das strukturverwandte Melphalan dieser Zusammenhange fiir das strukturverwandte Melphalan
`und untcr dcm Aspekt der Anwendung &ln Pntientcn als
`
`und tinter dem Aspekt der Anwendung am Patienten als und tinter dem Aspekt der Anwendung am Patienten als
`lnfusion grscheint isotonische Natriurnchloridl6sung nls Trii'
`
`Infusion erscheint isotonische Nutriumchloridlosung als Tra-Infusion erscheint isotonische Nutriumchloridlosung als Tra-
`gerl6sung f0r Bendamustinhydrochlorid geeignet, Ungiinstig
`
`gerlosung far Bendatnustinhydrochlorid geeignet. Unghnstig gerlosung far Bendatnustinhydrochlorid geeignet. Unghnstig
`ist nllerdings die nur mii0ige Losliclrkeit der Substanz in
`
`ist allerdings die nur miif3ige Loslichkeit der Substanz in ist allerdings die nur miif3ige Loslichkeit der Substanz in
`diescm Meditrm. so dall die Zcrsctzung bereits wirhrend dcs
`
`diesem Medium, so daft die Zcrsctzung bereits wahrend des diesem Medium, so daft die Zcrsctzung bereits wahrend des
`zcitaufwendigeu L6scvorgangs beginnt. ln reinern Wasser ist
`
`zeituufwendigen Losevorgangs beginnt. In reinern Wasser ist zeituufwendigen Losevorgangs beginnt. In reinern Wasser ist
`Eendrmustinhydrochlorid gut l6slich. Es empfiehlt siclr daher
`
`Bendamustinhydrochlorid gut Ihslicit. Es empfiehlt sich daher Bendamustinhydrochlorid gut Ihslicit. Es empfiehlt sich daher
`dus Ldscn in einer geringen Mengc Wasser fiir Injektions-
`
`das Losen in einer geringen Menge Wasser fur Injek lions-das Losen in einer geringen Menge Wasser fur Injek lions-
`zwecke und dus sofortige Verdiinnen mit isotonischcr Na'
`
`zwecke und das sofortige Vercliinnen mit isotonischer Na-zwecke und das sofortige Vercliinnen mit isotonischer Na-
`
`triumchloridlosung. triumchloridlosung.
`tri umchloridl6sung,
`
`
`Schema Schema
`Schemu
`/-cl
`R-N
`
`R -N R -N
`\Ct
`
`:
`
`Cl +R
`
`Cl + R - N + Cl + R - N +
`
`\-C1 \-C1
`
`-N+Lct
`l*'o
`ir H,0 ir H,0
`
`Y
`.-OH
`
`OH OH
`H'+ R :N
`
`N N
`
`+ R (cid:9)+ R (cid:9)
`\Ct
`
``-CI `-CI
`
`tl
`
`11 11
`lt
`+ 7QH
`
`/- OH /- OH
`Cl'+ R -N-
`
`H,0 H,0
`
`+ R - N (cid:9)+ R - N (cid:9)
`
`+H'
`
`+ Fl* + Fl*
`
`rQH
`
`OH OH
`R-N
`
`R -N (cid:9)R -N (cid:9)
`\-ot{
`
`\ OH- \ OH-
`Aulgrund entsprechender Vorversttche wurden folgende Be-
`
`Aufgrund entsprechender Vorversuche wurden folgende Be-Aufgrund entsprechender Vorversuche wurden folgende Be-
`dingungcn fiir die Stubilitdtsuntersuchungcn gcwiihlt: ?5 mg
`
`dingungen fur die Stubilitatsuntersuchungcn gewahlt: 25 mg dingungen fur die Stubilitatsuntersuchungcn gewahlt: 25 mg
`Bendarnustinhydrochlorid ( - I Ampullc Ribomustinto) wur-
`
`Bendamustinhydrochlorid (=1 Ampulle Ribomustie) wur-Bendamustinhydrochlorid (=1 Ampulle Ribomustie) wur-
`den zunlchsl in l0 ml Wasser gelost und anschlie0end mit
`
`den zuntichst in 10 ml Wasser geli5st und anschlieflend mit den zuntichst in 10 ml Wasser geli5st und anschlieflend mit
`0.9% Natriumchloridl6suug zu l00ml verd&nnt. Die damit
`
`0,9% NatriumehloridlOsung zu 100 ml verdannt. Die damit 0,9% NatriumehloridlOsung zu 100 ml verdannt. Die damit
`hcrgestellte Konzcntration von 0,25 rnglrnl entspricht thera-
`
`hergestellte Konzentration von 0,25 mg/ml entspricht thera-hergestellte Konzentration von 0,25 mg/ml entspricht thera-
`peutisclren Erfordcrnissen. Die S tabililii tsuu terstrchung wrrrde
`
`peutischen Erfordernissen. Die S tabilith tsuu tersuchung wurde peutischen Erfordernissen. Die S tabilith tsuu tersuchung wurde
`bci Temperuturen von 4 -'C und 23 "C durchgeffihrt. Die
`
`bci Temperuturen von 4 'C und 23 "C durchgefuhrt. Die bci Temperuturen von 4 'C und 23 "C durchgefuhrt. Die
`Bestimmung von Bendamustinhydrochlorid erfolgt mittels
`
`Bestimmung von Bendamustinhydrochlorid erfolgt mittels Bestimmung von Bendamustinhydrochlorid erfolgt mittels
`Reversed Plrase HPLC. Der ffrr Bcndarnustin chnrakte-
`
`Reversed Phase HPLC. Der Fur Bendainustin chnrakte-Reversed Phase HPLC. Der Fur Bendainustin chnrakte-
`ristischc Peak (Abb.) erschcint lpi ciner Retentionszeit (RT)
`
`ristische Peak (Abb.) erscheint bei einer Retentionszeit (RT) ristische Peak (Abb.) erscheint bei einer Retentionszeit (RT)
`von 5,91 min. Das erstc Zersetzungsprodukt, vermutliclt das
`
`von 5,93 min. Das erste Zersetzungsprodukt, vermutlich das von 5,93 min. Das erste Zersetzungsprodukt, vermutlich das
`Monohydrolyseprodukt. erscheint mit ciner RT von 4.t4 rnin.
`
`Monohydrolyseprodukt, erscheint mit einer RT von 4,14 min. Monohydrolyseprodukt, erscheint mit einer RT von 4,14 min.
`Bei dem als ..unknown" bezeichneten Peak bei einer RT von
`
`Bei dem als „unknown" bezeichneten Peak bei einer RT von Bei dem als „unknown" bezeichneten Peak bei einer RT von
`5,23 min hundelt es sich um ein Nebcnprodukt aus dcr
`
`5,23 min handelt es sich um ein Nebenprodukt aus der 5,23 min handelt es sich um ein Nebenprodukt aus der
`Synthese. Mittlcrweilc isL es durch Optimierung des Syn-
`
`Synthese. Mittlerweile ist es durch Optimierung des Syn-Synthese. Mittlerweile ist es durch Optimierung des Syn-
`theseverfuhrens gelungen, die Verunrcinigung vollig zu elimi-
`
`theseverfahrens gelungen, die Verunreinigung vollig zu elimi-theseverfahrens gelungen, die Verunreinigung vollig zu elimi-
`niercn [6]. Die Fliiche dieses Peaks iindert sich wiihrend der
`
`niercn [6]. Die Fliiche dieses Peaks tindert sich wiih rend der niercn [6]. Die Fliiche dieses Peaks tindert sich wiih rend der
`gesamtcn Analysezeit nicht. Nuch einer Aufbcwahrungszeit
`
`gesamten Analysezeit nicht. Nuch diner Autbewahrungszeit gesamten Analysezeit nicht. Nuch diner Autbewahrungszeit
`von ll9h ist irn Chromatogramrn nebcn dcr deutlichen
`
`von 119 h ist im Chromatogramm neben der deutlichen von 119 h ist im Chromatogramm neben der deutlichen
`Zunahmc dcs Monohydroxyderivates ein vicrtcr Peak bei
`
`Zunahme des Monohydroxyderivntes ein vierter Peak bei Zunahme des Monohydroxyderivntes ein vierter Peak bei
`einer ltT von 3,78 rnin zu erkennen, wobei es sich um dus
`
`einer RT von 3,78 min zu erkennen, wobei es sich urn des einer RT von 3,78 min zu erkennen, wobei es sich urn des
`Dihydroxyderivat handelt. Mit einer Probe der kiirzlich als
`
`Dihydroxyderivat handelt. Mit einer Probe der khrzlich als Dihydroxyderivat handelt. Mit einer Probe der khrzlich als
`Dihydroxydcrivut charakterisierten Vcrbindung [7] war cs
`
`Dihydroxyderivat charakterisierten Verbindung [7] war es Dihydroxyderivat charakterisierten Verbindung [7] war es
`mtiglich. dicscs Zcrsctzuugsprodukt in unserem H PLC Assay
`
`mOglich. theses Zersetzungsprodukt in unserem H PLC Assay mOglich. theses Zersetzungsprodukt in unserem H PLC Assay
`zu idenlihzicrcn.
`
`zu identifizieren. zu identifizieren.
`Aufgrund der rusch fortschreitdnden Hydrolyse von wiillrigen
`
`Aufgrund der nisch fortschreitdnden Hydrolyse von wiiI3rigen Aufgrund der nisch fortschreitdnden Hydrolyse von wiiI3rigen
`Bendamustinhyd rochloridl 6sun gen d0rfen bci allen chrom6-
`
`Bendamustinhydrochloridli5sungen cihrfen bei alien chroma-Bendamustinhydrochloridli5sungen cihrfen bei alien chroma-
`togruphischen Bcstinrnrungcn und entsprechcndcn Validie-
`
`tographischen Bestimmungen und entsprechenden Validie-tographischen Bestimmungen und entsprechenden Validie-
`nlngcn nur frisch hergestellte L6sungcn verwendet werdcn.
`
`rungen nur frisch hergestellte Losungen verwendet werdcn, rungen nur frisch hergestellte Losungen verwendet werdcn,
`die unmittelbar nach ihrer Zubereituog injizidLt wcrden miis-
`
`die unmittelbar nue') ihrer Zubereitung injiziert werden mus-die unmittelbar nue') ihrer Zubereitung injiziert werden mus-
`sen. Siimtliche Standurdprobcn zur Validierung dcr Methodc
`
`sen. Samtliche Standurdproben zur Validierung der Methode sen. Samtliche Standurdproben zur Validierung der Methode
`wurdcn mit Ribomustine dr.rrchgcflhrt. Die MeRcrgebnissc
`
`wurden mit Ribomustin durchgefiihrt. Die MeBergebnisse wurden mit Ribomustin durchgefiihrt. Die MeBergebnisse
`crlauben somit cine relntive Aussage zur Stsbilitiit von Benda-
`
`erlauben somit eine relative Aussage zur Stabilitat von Benda- erlauben somit eine relative Aussage zur Stabilitat von Benda-
`
`
`776 776
`176
`
`'-9
`
`X PO08060268 X PO08060268
`xP008060268
`
`mustin, was fiir unscrc Fragcstellung ausreichcnd ist.
`
`mustin, was far unsere Fragestellung ausreichend ist. mustin, was far unsere Fragestellung ausreichend ist.
`Vor Versuchsbeginn hatte die frisch hcrgestellte Untcfs$-
`
`Vor Versuchsheginn hatte die frisch hergestellte Unteigi-Vor Versuchsheginn hatte die frisch hergestellte Unteigi-
`chungsl6sung elnen pH-Wcrt von 4. Dic Bestimmung der llcr-
`
`chungslosung einen pH-Wert von 4. Die Bestimmung der Jcr-chungslosung einen pH-Wert von 4. Die Bestimmung der Jcr-
`sctzung yon Bcndarnustinhydrochlorid-l nfusionslOsungen er-
`
`setzung von Bendamustinhydrochlorid-Infusionslosungen er-setzung von Bendamustinhydrochlorid-Infusionslosungen er-
`folgtc zuniichst bci 4 "C. Dic Me8ergebnisse sind in Tabe[c I
`
`folgte zunhchst bei 4 "C. Die Mel3ergebnisse sind in Tabellc 1 folgte zunhchst bei 4 "C. Die Mel3ergebnisse sind in Tabellc 1
`zusammengcfu8t, Dic Gaschwindigkeitskonstfinte (tk) und
`
`zusammengefaftt. Die Geschwindigkeitskonstante ( tk) und zusammengefaftt. Die Geschwindigkeitskonstante ( tk) und
`die Zcit bis zum Verlust von tOo/u wurden mittcls exponefl-
`
`die Zeit bis zum Verlust von 10% wurden millets exponen-die Zeit bis zum Verlust von 10% wurden millets exponen-
`tieller Regression berechnct. Fiir rk crgab sich cin Wert von
`
`tidier Regression berechnet. Fiir 'k ergab sich ein Wert von tidier Regression berechnet. Fiir 'k ergab sich ein Wert von
`-0,00093 h- r. Dcr Korrclationskocffizicnt wurde mil Q989i
`
`-0,00093 h - ', Der Korrelationskoeffizient wurde mit 0,9892 -0,00093 h - ', Der Korrelationskoeffizient wurde mit 0,9892
`crmittelt. Hicraus crrechnet sich fiir dic Stabjlitdt (tgo) vor
`
`ermittelt. Hieraus crrechnet sich fiir die Stabilitat (t90) vor. ermittelt. Hieraus crrechnet sich fiir die Stabilitat (t90) vor.
`Bendamustinhydrochlorid in Natriumclrloridl6sung 0,81%
`
`Bendamustinhydrochlorid in Natriumehloridlosung 0,810/c Bendamustinhydrochlorid in Natriumehloridlosung 0,810/c
`bei 4 'C e in Wert von I 18.5 h. Weiterhin wurde dic Stabilitit
`
`bei 4 -C ein Wert von 118,5 h. Weiterhin wurde die Stabilitill bei 4 -C ein Wert von 118,5 h. Weiterhin wurde die Stabilitill
`von Bendamustinhydrochlorid-lnfusionsliisung bei 23'C bc.
`
`von .13endamustinhydrochlorid-Infusionsliisung bei 23 °C be-von .13endamustinhydrochlorid-Infusionsliisung bei 23 °C be-
`stinrnlt. Dic McBergcbnissc sind in T.lbellc 2 zusnmmengcfa0t
`
`s timmt. Dic MeBergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefaBt s timmt. Dic MeBergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefaBt
`Dic Ceschwindigkcitskonstante (tk1 und die Zeit bis zurr
`
`Dic Geschwindigkeitskonstante ('k) und die Zeit bis zurr Dic Geschwindigkeitskonstante ('k) und die Zeit bis zurr
`Verlust vorr l0'% {tuu) wurden mittcls cxponentieller Regrcs'
`
`Verlust von 10% (t„) wurden mittels exponentieller Regres• Verlust von 10% (t„) wurden mittels exponentieller Regres•
`sion berechrret. Ftir rk ergtb sich ein Wert von -0,01165 h-'
`
`sion berechnet. Fur 'k ergab sich ein Wert von -0,01165 sion berechnet. Fur 'k ergab sich ein Wert von -0,01165
`(Korrelationskocllizicnt 0,9985). Hicraus er,recbnet sicb ftit
`
`(Korrelationskneffizient 0,9985). Hieraus errechnet sicb fill (Korrelationskneffizient 0,9985). Hieraus errechnet sicb fill
`die StabilitAt von Bcndamustinhydrochlorid (teo) in Natrium
`
`die Stabilitat von Bendamustinhydrochlorid (t90) in Natrium die Stabilitat von Bendamustinhydrochlorid (t90) in Natrium
`chloridfcisung},Slo/n bei 23 "C ein Wert von 9,2 h.
`
`chloridlosung 0,8J% bei 23 `'C ein Wert von 9,2 h. chloridlosung 0,8J% bei 23 `'C ein Wert von 9,2 h.
`
`I'ubctlc l: Strbilitiitsdutcn flr Ocndamustlnhytlrnchlorld bci 4 eC
`
`Tabelle 1: Stabilitatsdatcn fur Bendamustinhydrochlorid bei 4 °C Tabelle 1: Stabilitatsdatcn fur Bendamustinhydrochlorid bei 4 °C
`Milldscrt dc. Sttrtrdrrd- Vrriolionr. Ochah rn
`Zzit
`
`Gninill an Gninill an
`
`Variations- Variations-
`
`Mitielweri dFr Mitielweri dFr
`
`Stundurd- Stundurd-
`
`Zcit (cid:9)Zcit (cid:9)
`B!'nrctrncn nbutichung locmricnl
`
`gemesscnen (cid:9)gemesscnen (cid:9)
`lltl
`
`Unntlamustin- Unntlamustin-
`
`koe