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`11051115111111 DES SCIENCES.
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`CYAN EXHIBIT 1011
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`PHYSIOLOGIE —-— Tramformation do 'l'asmamhine 1m vitamins A ch32 la
`Rat albinos: néoformatwn111 ViVD at in vitro. Nate (') do M. 3111111 01111111111111,
`Mu“ 1111111111 MAssoxx'i', Mmea Tunisia (2111:qu e1;
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`présentée par M. Robert Courrier.
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`Chcz 11: Rat carcncé, I‘adminlstrntion per 0.1 do diacétate d'astaxanthine prove me
`une néoformatlon de vitamine A décelable au niveau de Pall L’ax'pértmentat 011
`m vitro
`ermet dcprécisar one cat organe est bien 111 31111311 de la transformation
`. 111123111111thue qui conduit do l’nstaxanthlne nu retinal.
`Chez 16 Rat alliinos corencé en vitamine A, l’astaxanthine (3 3'-dihydro-
`1131-411'-dicét0—$-caroténe) manifesto .une activité électi'vement
`anti-
`xérophtalmiqne.'E11 eiiet, l’administration quotidienne do 10 A 15 pg do
`pigment guérit tapidement lcs iésions oculaircs sans pwvoquer d’accrois-
`sement pondéral qui ne 3observe qu’avec des dosgs nettement supérieuros(' )
`1‘1 ( ).Po111' les P01530113 cependant, l‘astaxanthiize est une provitamine A
`authentique car chez Gambusia holbroaki, elle conduit A one néoformation
`dc rétinol décelahle e11 particulier dans la muqueuse inteotinale (“ ), (" )‘, (‘).
`La confrontation de ces faits suggéro que le Rat pourrait avoir conservé
`Vau niveau do i’oail
`la faculté rostreinte de convertir I’astaxanthine en
`. vitamine A. Telie est (in mains l’hypothése qlii a été sonmise 1‘1 111 sanotion
`expérimentale.
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`Dans une premiére expérience, du diacétate d’astaxanthine 11 été admi-
`. nistré 1‘1 dos rats carencés qui ont ensuite été sacrifiés on méine temps que
`des témoins et la vitamine A a été dosée parallélement dam-1 less you): do,
`chaque catégOrie d-e sujcts. Dans la seconde expérience, les yeux d’animaux
`carencés ont été divisés en dcux lots: le premier a été incubé e11 préaence
`do diacétate d’astoxanthine, 1e second a été traité de méme, mais sans
`adjonction dc pigment;
`les concentrations respectives en rétinol out,
`ensuite été déterminées.
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`Pnfzmnmrior: n11 11111111111111 D’ASTAXANTHINE. '-—-— Les paroi‘s des poches
`stqnacales d’Aristeomorpha foliacea, Risso, ct d’Aristeus (inter/111111113, Risso
`(grosses crevettos rouges de latribu des Pénéidés) contiennent 1m chromo¥
`protéide ,bleu ,dont 1c grOuppment prosthétique V est
`l’astaxanthine (*).
`Aprés dissection,
`ies poches sont vidées de leur content] 9.1; agitées avec
`de l’eau distillée 011 ie chrornoprotéide se dissout. L11 solution est alors
`additionnée de quatre fois son volume (1’ acétone: .l’ astaxanthino so détache
`do .111 copule protéique et iazaolution se coiore en rouge orangé. Par addition
`d’éther do pétrolc' ct d’eau, la pigment passe dans la phase légére' qui est
`séparée et séchée sur-—sulfato do sodium anhydre. La 11011111011 est filtrée our
`colonne de magnésie qui est onsuite lavée 1‘1 l‘éther de’ pétrole, puis avec do
`[’hexane .additiomié de 2 vol 0/0 d'acétone (éiimination des caroténes ct;
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`SEANGE DU. 20 MARS .1961.
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`dos asters do vitamins A) at enfin «vac unvmélange do 93 1111 d'hexane at
`de 8 m1 d’éthanol (éliminatiou du ré‘tinol). La 1201011119 031: alorstronconnée,
`la zona pigmentée est immergée- dhnsde la pyridino qui .par élution 1e
`colors on rouge. La. solution concontrée sous prosvsion réduite et sous azote
`est additionnée d‘anhydride acétique (XX gamma/mi). Aprés 9h 1 la
`températ'ure ambiante,
`lo diaeétate est repris par l’éther do pétrolo. La
`solution. est‘ lavée, séchée et chromatographiéelsnr alumina. La colonne-
`est traitée comma cello do magnésie. La solution pyridinique finaiemont
`obtenue est additionnée d’éther do pétrole et d’eau. La phase légére est
`aéparéo, séchée et ooncentrée. Le résidu est repris par la pyfidine ohaude,
`» additionné d 1111 tiers do volume d 111111 at abandonné 24 h 91 0° C. Le préoipité
`cristallin est purifié par deux rocristallisations.
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`rats
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`11. Expérience in YiVO; 1..
`PROTOCOLES ET RESULTATB. —-~»
`Wistar, pesant 32 g sont sevrés et soumisau régime do base exempt de
`facteurs vitaminiques A. Aprés 40 jours, las signes deoarenoe étant mani-
`festes, ies animaux sont partagés en troia lots rooevant quotidionnement :
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`Lot A : régime do base seul; lot 3' :v régime do base" + 3 pg do vita-
`mine A (“) ;lot C irégime de base + 15 pg do diacétato d’astaxanthino (').
`Aprés 20 jours, les animaux sont décapité‘s et les rétines sont prélevées
`selou (9). Les réSuItats des dosages de vitamine A ofioctués selou (‘) sur
`l’insaponifiahle do l’ensemble dos rétines do chaque 1111; sent.
`Lot A traces; lot B: 1 pg; lot C: 2,1 pg.
`b. Expérience in vitro. —-— 12 rats oarencé‘s dans les mémes conditions
`que les précédents sont décapités 'au [109 jour. Dans deux petits sacs de
`collodion, on introdoit 1 ml de sérum sanguin frais et 1 mmoie d’ac--tocophérol
`dis ersée clans 1 ml d’eau. Dans l’un djes sacs on lace [as
`61121 droits
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`de six Ides sujets et les yeux gauches des six autros (lot I), dans la deuxieme
`sac, on introduit les 12 yeux restants (1111. II) at 1 mg do diacé‘tate d’aStaxan~
`thine en dispersion dans 1 ml do Tween 80. Le‘s sacs sont immergés dans
`une solution tamponnée do Krebs-Ringer e1; maintenus a l'étuve a 37° C
`pendant 12 I1 Le dosage deia vitamins A effectué 3111' l’insaponifiahle do ia
`totalité dos yeux do ohaque lot fournit les valeurs suivantes :
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`Lot I : 0,75 :1g;llot [I : 1,65 9g.
`Discussion.
`-— L’e’tude spectrophotométrique do la solution (113- pigment.
`avant chromatographic no révéle ni vitamins A, ni caroténe. Si dea traces
`de 'ces substances avaient oependant échappé .1 l’examen, alias soraient
`éliminées par les Iavages dos colonnes pratiqués dans (:6 but solonflfl"). La
`recristallisation du dia‘cétate d’astaxanthino coustitue enfin one derniére
`purification. Le. controlet suivant exclut d’ailleurs l’interférenoe d’une
`impuroté : dams les mémes conditions que cellos .d-e l’oxpérienco in vitro,
`deux lots de fragments d’intestin do rats oarencés ont été inou-bés on p16-
`sence, l’un do {5.caroténo,
`l’autlfe degdiaoétato d’astaxanthine. U119 néo-
`formation do vitamine A été constatéo uniqu'oment dans le premier lot.
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`AMHEMEE DES SCIENCES
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`Ainai, dens ies conditious expérimentaleé décfites, in viva comma in viii-o,
`'la vitamine A iiéoformé'e at (16691130 dang Pail ne peut étre due qu’i is >
`transformation de l’astaxanthine. De's expériénc‘es complémentaires tente-
`rant de précisei' si, cqmme Gala est vrm'iiemblable, c’est la rétine gui effectue
`la conversion enzymatique.
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`Conclusion. - Les résultatsenregistrés vérifient lhypothése de travail.
`'qui a dicté ces expé‘riences : chez 13 Rat albinos ca‘réncé en vitamine A
`l'administratioii de diacétate d’astaxanthine proquue uns néoformation
`de réti-nol an nivieau dc i’ccil. L’expérimentation in vitro aboutit A la méme
`constatation et iodalise en outre an tissu oouiaiija 1e siége de la réaction.
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`l‘) Séance du 13 mars 195l.
`9) R. GMNGAUD at M119 R. MASSONET, Comptes rendus, 227, 1948, p. 568.
`(3) R.G1ULNGAUD et M"2 R. Museum, Samples {endus,230,195o, p. 1319
`{-1) R. GRANGAIiD, These dc Doctoral as sciences physiques, Lyon, 1950.
`U) M110 R. MASSONBT, This: dc Doctoraf as sciences inaturelles, Lyon,1958.
`(5) R. GRANGAUD at M119 R. MASSONET, Comptes rendus, 241. 1955, 3). may.
`('3) R. GHANGAUD, P. VIGNMS. Ml“ R. MA§SONET at. J. P. Mou’ri, Comptes rzndus,
`243, 1956, p. £170.
`(7) J. P. Mom-n, These de Doctoral d'Etdt (Pharmacle), Alger, 1959.
`0} En solution dans de l’hails végétaie dévltaminée additionnée de 2 % d’aaM-tocophérol
`(9) ..J M. Laws, 0. BonAnst, K. G. FALK etG. ‘Mc GUinE,J. Nutrition,23, [9151 p. 351.
`(in) S. Y. THOMPSON, J. GANGULY et S.‘ K. Kori. Brit. J. Nut, 3, no 1, 1949, p. 57.
`(Laboralolre dc ‘Chi‘mie bialogique. Faculté‘ de Médécine etAPhwjmcicie d’AIgcr.)
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