CYAN EXHIBIT 1003
`
`N° D’oRmu=. :
`1 8 1
`
`THESES
`
`A LA EACULTE DES SCIENCES DE L’UNIVERSITE
`
`DE LYON
`
`POUR OBTENIR
`
`LE GRADE DE DOCTEUR ES SCIENCES PHYSIQUES
`
`RENE QRANGAUD
`Maitre de Conférences, Agrégé
`21 la Faculté de Médecine et Pharmacie d’Alger
`
`1" THESE. — RECHERCHES sun L’As1'AxAN'rH1NE, NOUVEAU FACTEUR
`VITAMINIQUE A.
`
`2° THEE. — PROPOSITIONS DONNEES PAR LA FAcUL1'l5:.
`
`Soutenues le 23 octobre 1950 devant la Commission d’examen.
`
`.
`MM. CORDIER .
`BERNARD .
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
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`
`.
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`
`.
`.
`
`.
`.
`
`.
`.
`
`. ..
`.
`.
`.
`
`Président.
`
`MEUNIER
`
`Examinajeurs.
`
`EDITIONS DESOER
`21, RUE SAINTE-VJERONIQUE
`
`

`
`UNIVERSITE DE 1.YON - FACULTE DES SCIENCES
`
`M. Dou1N, 33:, §, Q 1.
`
`DOYEN
`
`ASSESSEUR
`
`M. EYRAUD, Q I., Calcul dz‘fl’e'rentz'el et intégral.
`
`DOYEN HONORAIRE
`
`M. LONGCHAMBON,
`
`‘IC, §, Q 1., +, Médaille de la Résistance.
`
`PROFESSEURS I-IONORAIRES
`
`MM. VESSIOT, C. 9:, Q 1.
`DULAC,
`35¢. Q 1.
`VANEY, 35:, Q? 1., +.
`MEUNIER, O. 33‘, Q I.
`
`MM.
`,
`
`SIRE, ‘It, Q I., +.
`FROMAGEOT, Q I.
`LocQU1N, it, Q I.
`
`PROFESSEURS
`
`MM. LONGCHAMBON, zéc, §, @ 1., +, Médaille de la Résistance, Min-éralogie.
`DOUIN, 5'8, L ‘iii 1., Botanique.
`~
`D1-:JARDIN,
`3%, Q 1., Physique.
`SOLLAUD, Q, I., Zoologie.
`THIBAUD, Q, 1., Physique expérimemfale.
`EYRAUD, Q, 1., Calcul diflérentiel et imfégral.
`TI-IORAL, Q A., Géologie.
`DCEUVRE, Q I., Chimie organique.
`CORDIER,
`‘Q A, §, Chevalier Mérite agricole, Physiologie.
`PRETTRE,
`iii? A., Chimie imiustrielle.
`KUHNER, Q A., Botanique.
`COURTY, Q A., Chimie-Physique.
`MALI3:coT, Méctmxique mtionnelle.
`PARIS, Chimie minérale.
`AUM15:RAs, Q5 1., Chimie.
`DE LARAMBERGUE,
`‘Q A., Zoologie.
`BERNARD, Q A., Physique.
`VIRET, Q 1., Géologie.
`BENARD, Chimie.
`CoLoNGE, Q‘ A., Chimie.
`
`MAiT1u=.s DE CONFERENCES ET CHARGES DE COURS
`
`MM. DUFAY,
`
`ii‘? 1., Astronomie at Physique supérieure.
`
`

`
`
`
`MM. JANIN, Physique.
`MOUSSA, Physique.
`WAUTIE11, Zoologie.
`Mme CHAIX, Chimie hiologique.
`MM. BRACONNIER, Mathématiques.
`NIGOND, Zoologie.
`MENTZER, Chimie hiologique.
`
`CHARGES DE COURS coM1>L15:MENTAIREs
`MM. STRIFFLING, Météorologie.
`PELLETIER, Géologie.
`M‘“° FIASSON. Zoologie.
`
`MM. GARRIGUES, Batauique.
`ME§NARD, Physique.
`P1=.NNANEAc’H, Mathématiques.
`GAUTHIER J., Chimie.
`MAZENOT, Géologie.
`GAUTHLER H., Géologie.
`MURET, Botanique.
`FIASSON, Zoologie.
`
`M. Roux, Q’ I.
`
`SECRETAIRE
`
`A mg femme et :2 me: enfcmI«‘S-'
`ezm—
`,
`>
`pml Danielle Michelle, Geneviéve,
`
`I
`
`jacqueline, Nzcole et Iecm-Mzc/ael.
`
`~
`A mes parents et a mes heat
`
`‘
`A tous 1“ mwns
`
`_
`
`ux- arents.
`17
`
`\_
`
`

`
`PREFACE
`
`tenzlent
`En dépit a'es récentes et irnportantes acquisitions qui
`a éclairer le rnécanisme de Faction de la 1/itarnine A dans les processus
`bioc/Jimiques [68], [69], [70], [103], [76], il n’est pas possible
`d’attribuer ii l’un ou l’autre des symptérnes ale carence une 1/aleur
`de spécificité : la stabilisation puis la cbute ale poids qui surviennent
`c/oez l’animal carencé,
`les lésions épitbéliales et en particulier la
`xérop/atalmie ne sont en définitive que des manifestations secon-
`daires ole la « lésion biocbimique » due au défaut du biocatalyseur.
`
`xi
`Il n’en reste pas moins que Padministration de 1/itarnine A,
`condition de n’étre pas trop tardiue, entraine la régression puis la
`disparition ale ces syrnptémes, la guérison de la xéropbtalrnie n’étant
`obtenue c/aez le rat blanc qu’a1/ec des doses de 1/itarnine supérieures
`:2 celles permettant la reprise a'e poids. Quant aux facteurs vitami-
`niques A autres que l’axe'rop/atol, leurs eflets sur la carence ne se
`distinguent de ceux de la 1/itamine A elle-rnéme que par des difié—
`rences globales d’intensite'. C’est qu’en eflet l’organis1ne utilise ces
`substances en les transforrnant en axérop/otol : ce mode d’utilisation,
`certain pour les caroténes et les caroténoides naturels, a'ont l’acti1/ité
`1/itarninique est reconnue, semble bien é‘tre égalernent celui de corn-
`posés synt/aétiques actifs tels que le [5-apo—2-carotinal [15].
`Au cours ole rec/aerc/yes sur l’acti1/ité uitaminique A d’une buile
`de Crnstacé, tandis que l’action sur la reprise de poids était pratique—
`ment nulle, nous a1/ons enregistre’ un efiet curatif intense sur les
`lesions oculaires. Cette constatation inattendue, en désaccord avec
`les données classiques, devait nous conduire a1/ec M"" R. MASSONET
`(2 em/isager puis a- vérifier la présence clans l’/mile étudiée d’un
`facteur 1/itaminique A se distinguant précisément de tous les autres
`facteurs de ce groupe par la prédorninance de l’acti1/ité antixe'—
`rop/atalrnique sur l’efi'et de croissance [27].
`Nous a1/ons identifié ce principe antixérop/atalmique nouveau et
`rnontré qu’il s’agit de l’astaxant/nine —- l’un des principaux caro-
`
`

`
`SOMMAIRE
`
`INTRODUCTION: Importance de Pastaxanthine parmi
`
`les caroténoides nacurels.
`
`CHAPITRE 1: Constitution et propriétés physiques et chimiques de l’astacine,
`de Yastaxanthine et de leurs dérivés.
`
`CI-IAPITRE II: L’asI:axanthine chez les étres Vivants. — Etude du pigment
`d’Arz'steomorpba foliacea (Pemzeidae),
`
`CI-IAPITRE III: Importance biologique de Pastaxanthine.
`
`A. —— Origine et destinée de Pastaxanthine dans le monde vivant.
`
`B. — L’astaxanthine nouvelle vitamine du groupe A:
`
`I. — Activité vitaminique A des huiles d’Arz'steomorp/ya foliatea.
`
`II. -— Activité antixérophtalmique du pigment caroténoide d’Arz'steo-
`morpba foliacea.
`1° Activité du pigment extrait de l’huile d’hépato-pancréas.
`2° Activité du pigment extrait de Yhypoderme.
`
`III. -— Localisation dc Pastaxanthine dans Forganisme du rat
`Mise en évidence dans la rétine.
`
`traité.
`
`CHAPITRE IV: Discussion des résultats,
`
`1° Constitution chimique et activité vitaminique de Pastaxanthine.
`
`2° Dissociation de l’activité antixérophtalmique et de l’effet de croissance
`de Yastaxanthine chez le rat blanc carencé en vitamine A.
`
`3° L’astaxanthine et le problérne de la vision.
`
`CONCLUSIONS c15:NE'11ALEs.
`
`

`
`loin (1) ,
`3’ 3 "dilly
`
`Pilypothése q
`{I Y preexiste pas mais s
`3 Dartir de 1’
`
`JUCKER [40]
`II n’en rest
`C13-ns des espéce
`Plus Variés :
`
`____i____
`
`(1) Page 19 et suivautes.
`(2) Sam ’
`' h
`'
`o
`dans 1’aIco:in:i) 8? °
`que dans Péther de péu-01
`(3) Le pigment
`
`3 haematochmmPastaxanthine et on
`e, carotinme, eugle.
`
`CHAPITRE I
`
`CONSTITUTION,
`PROPRIETES PHYSIQUES ET CHIMIQUES
`
`DE L’ASTACINE, DE L’ASTAXANTHINE
`
`ET DE LEURS DERIVES
`
`A.
`
`— ASTACINE ET DERIVES.
`
`La nature caroténoide de l’astacine et la présence d’oxygéne dans
`chacun des noyaux de §5—ionone ont été reconnues par KUHN et
`LEDERER (45).
`
`(38) ont établi en 1934 la formule brute
`P. KARRER et coll.
`C40H4sO4 et la constitution du pigment qui est celle d’un tétra-
`céto-(3-caroténe. Cette constitution est déduite de la formule brute
`et des propriétés des groupes oxygénés. L’astacine, en efiet, donne
`une dioxime possédant 4 atomes d’hydrogéne actif et dont deux
`appartiennent aux radicaux oximes,
`les deux autres étant fixés £1
`deux carbonyles énolisés. Le caroténoide posséde done 4 groupes
`cétoniques qui ne sont pas équivalents. L’orthophényléne diamine
`réagit en donnant la bis—phénazine‘ astacine ce qui
`indique que
`chaque noyau de B—ionone
`renferme deux groupes carbonyles.
`L’oxydation par le permanganate donne de 1’acide dirnéthyl malo-
`nique et
`l’oxydation du dérivé diphénazinique conduit 5 l’acide
`a—zz-diméthyl succinique, ce qui établit que les groupes carbonyles
`occupent les sommets 3, 4, 3’, 4’. La formule d_e constitution de
`I’astacine est donc :
`
`/CH;
`CH;
`CH1
`CH3
`CH;
`CH:
`\
`1
`I
`I
`I
`/°\
`CH;
`C.CH=CH.C=CH.CH=CH.C=CH.CH=CH.CH=C.CH=CH.CH=C.CH=CH.C
`c.cH,
`oc
`H,c.c
`
`C0
`
`CH:
`co
`
`CO
`
`

`
`Le spectre d’absorption de l’astacine est caractéristique et présente
`une large bande £1 maximum unique (500 mu dans la pyridine et
`510 mu dans le sulfure de carbone). Le spectre d’absorption et le
`comportement du pigment vis-£1—vis de la soude sont les deux catac-
`téres principaux permettant son identification. Autres caractéres
`rnoins spécifiques : dans l’acide sulfurique concentré, Yastacine se
`dissout en donnant une coloration bleu foncé. La solution chloro-
`formique donne
`avec
`le
`réactif
`au trichlorure d’antimoine
`(R. de CARR et PRICE) une coloration bleu—vert.
`L’astacine est trés résistante E; l’oxydation 5 Pair. KUHN, LEDE-
`KER et DEUTSCH (46) ont obtenu le diacétate d’astacine. Le dipal-
`mitate (astacéine) a été également préparé (KUHN et coll. [48]).
`
`B.
`
`- ASTAXANTHINE ET DERIVES.
`
`KUHN et SORENSEN (47) ont établi que Pastaxanthine posséde
`quatre atomes d’hydrogéne de plus que l’astacine, sa formule brute
`étant C.,0H52O.,. Ils ont montré en effet que la transformation, en
`milieu alcalin et en présence d’air, de l’astaXanthine en astacine est
`une autoxydation d’un éne—diol qui absorbe deux molécules d’oxy—
`géne avec formation de deux molécules d’eau oxygénée. Faisant
`dériver la structure de Pastaxanthine de celle de l’astacine ils lui
`ont assigné la formule suivante qui est celle du 3,3'—dihydroxy-4,4'-
`dicéto-(3—caroténe :
`
`CH.
`CH,
`\/
`Cl-lx
`CH:
`CH:
`CH:
`/C
`CH;
`C.CH=CH.C=CH.CH=CH.C=CH.CH=CH.CH=C CH=CH.CH=C.CH=CH.C
`ll
`HOHC
`C . CH;
`H;C A C
`
`CH, CH,
`\/
`C
`CH,
`CHDH
`
`C0
`
`C0
`
`Astaxanthine (forme cétonique).
`
`CH4
`
`CH;
`CH;
`I
`I
`C.CH=CH.C=CH.CH=CH.C=CH.CH=CH.CH= c.cH=cH.cH=c.cH=cH.c
`C-CHa
`H,c.c
`
`CH“ CH;
`\/C
`
`\cH,
`COH
`
`_ L’astacine c
`violettes £1
`SORENSEN (4s)] (1)_
`“L’aStacine est insoluble dans I’
`l ether, l’éther de
`eau> trés difficilement soluble dans
`b
`e
`pétrole et le métha
`I
`‘
`'.
`'
`’acétate d’éthYle e
`no ’ dlfllcllement soluble dam
`1: 1’acide acétiqu
`
`ticidifigaltion P31‘ l’acide acé
`“X.Vl0 ets et etmcelants d
`
`(1) On trouve aussi 240“
`
`zone
`,
`L
`Ion
`ne.
`es eluants sont Ie
`thanol ainsi que I’éther de
`
`Astaxanthine (forme énolique).
`
`

`
`:§I:(e):fNSEN S’a13P‘-1Y3I1t sur des consid
`e t
`érations d’ordre énergétique
`chai‘
`n1 flu‘? C est le SIOUPC Carbon
`yle qui est °°nl“811é avec la
`E "31 P0 Yenique.
`'n ’absence d’ox
`é
`a
`.
`sel bleu foncé auqu}t:lgII;eL’I1_I1;lta:;a'é1th1ne d
`'
`ORE
`e
`
`onne avec la potasse un
`
`réaction de CARR et PRICE, cf. fig. III). Cette réaction correspond
`a la mésomérie suivante qui implique l’oscillation de six doublets
`électroniques [P. MEUNIER(1)] :
`
`’ovoverdine des oeufs de
`’
`hornard
`*
`'
`'
`Peut egalement étre c
`onsideree comme un d’ -
`,
`,
`forme énoli ue
`'
`r
`erive de la
`‘I
`et representee par le schema suivant :
`CHI
`CH;
`
`CH,
`CH‘
`>C/
`CH, cu,
`CH.
`<12:-I:
`C.CH=CH c=cH.CH=CH.é=CH cH_CH CH “Ha
`\c’
`C
`—c CH—CH CH=c .:,.,_CH C/ \cH’
`— 0/ \c/
`(E
`H.C.(l;l
`,9-
`\./:,_
`Prarreiinl:.++
`_o_
`3"
`l’lv.';l¢’il1(1+
`
`,.
`gfoupement
`r0 1;
`proteide. Ce mode d’union nap ls. h
`exp lque P35 Cepefldant la résistance
`du com 1
`'-
`P€Xe
`proteique a l’aut
`‘
`.
`ox d t
`Y 21 ion. KUHN et SORENSEN
`envisagent que d’autres liaiso
`d
`,.
`118
`e 113;;
`~
`u're encolle mconnue elltre
`19. proteine et
`le caroténoide ,d '
`celui-ci,de Poxydation : le group
`encastre dans la protéine (1)
`En réalité I
`-
`, a coloration
`'
`'
`_
`8111‘ Pastaxanthine en l’abscel:l*llc Se g(1i’eVe1°PPe P31‘ actlon de la potasse
`ement etre
`e
`°XY8éI1€ doit actuell
`'*
`inte1'P1‘étée comme l’effet b
`_
`athochrome d’u
`I
`-
`‘me (73) Cmaxlmum d’absorptio
`He reactlon d’halochro—
`
`
`
`.
`® K60
`
`O
`\/
`
`éeK®
`
`Quant aux édifices hétéroprotéidiques tels que l’ovoverdine, on peut
`considérer que l’union e-ntre astaxanthine et protéine y est encore
`du méme
`type,
`l’extrémité
`d’une
`chaine
`polypeptidique
`— CO - CH — NH3+ occupant la place de l’ion K+.
`
`R
`
`Le poids moléculaire de l’ovoverdine a été déterminé par divers
`expérimentateurs, WYCKOFF (112) lui attribue une valeur d’envi—
`ron 300.000. KUHN et SORENSEN ont décrit une méthode de pré-
`paration de l’ovoverdine. Le pigment est précipité de sa solution
`aqueuse par le sulfate d’ammonium 51 saturation. On peut le puri-
`fier par dissolution dans l’eau et ‘adsorption sur hydroxyde d’alu—
`minium puis élution par
`le sulfate d’ammonium it 40 % de
`saturation. Il suffit d’élever la concentration en sulfate d’ammonium
`pour reprécipiter le chromoprotéide. En répétant ces opérations 31
`plusieurs reprises on obtient un produit trés pur ou’ le caroténoide
`et la protéine sont unis dans le rapport de 1 it 242, ce qui donne un
`poids moléculaire de 144.000. STERN et SALOMON (93) attribuent
`£1 la protéine de l’ovoverdine le caractere d’une albumine. Dans ces
`conditions deux molécules de protéine seraient unies a une molécule
`d’astaxanthine.
`
`

`
`"
`du chrom
`oproteide est v
`bleumoir (carapace d,
`ariable selon les es éces :
`A5t“‘“5 Sammarus),
`P
`,
`d’Ast
`(09-ufs‘ et ovaires
`_V°r‘t
`W:”;‘;;::;"”:§;:‘:2;‘:,‘:;:‘£3’???
`5“l"’”5)a Vert brun (Gmn
`«
`I
`.
`.
`11 1'0 oa grossularza)
`(40), vlolet
`‘bleu (Aristeomor
`'
`' 1
`.
`P511 folmcea
`STERN et SALOMON (92) )cinvl0 et rouge (Amtem ‘m"“”””“’"5)-
`
`e
`
`Récemment, WA
`moprotéide bleu
`
`31 60° C sub‘
`'
`.
`.
`ssant du bl It egalement une dissocia-
`eu 3“ P011rpre.
`L3 chaleu-I’, les acides forts
`3
`les alcalis, l’acétone 1,
`5
`.
`_
`3
`tur
`-t
`,.
`alcool, en déna—
`an 13 Pmteme, permetten
`e c
`‘
`,.
`t d extraire facileme
`s.
`nt Pastaxanthine
`es divers chromoproteide
`Cell —
`‘
`-
`-
`,
`d’eau ellcl Se.dls5°ut alsemeflt
`e
`.
`,
`e Crlstalllse en tablett
`
`d
`I
`\
`)
`'
`'
`a pyridine d ou, par addition
`ans
`es étincelantes [F = 216° C (4())].
`
`SPECTRE D’ABSORPTION
`
`SEN (47) qui ont décrilzelitlroscopique est celle de KUHN et SOREN
`‘
`Spectre 5 tr ‘
`-
`015 maxlma Pour l’astaxan.
`mi‘ dans 13 PYridine). Selon WALD (105
`,
`d’erreur : TISCHER (97)),;ae:
`re d
`2
`.
`_
`.
`,
`I
`esterifiee Presente une large bande uni ue If I astaxanthme hbre ou
`Q
`-
`est comparable :51
`de l’astacine
`‘
`, mais par ra
`ort ‘
`-
`.
`,
`celui
`courtes longueurs daonde d1:P4 a 73 ce dernier 11
`ml
`.
`suivant la :::udec(:i1lé Vers les
`pour l’astaXanthin
`ii’
`e libre,
`le maximum est situé fir:-7 usolvant;
`l’heXane et 31 492
`mu environ dans la pyridine.
`0 mp» dans
`
`Parmi les caroténoides dont la constitution est établie de fagon
`sfire, Yastaxanthine et
`l’astacine sont les seuls qui présentent un
`spectre d’absorption a maximum unique (1).
`L’agitation de la solution d’astaXanthine dans l’éther de pétrole
`avec de l’alcoo1 5 85 % entraine tout le pigment dans la phase
`alcoolique : Pastaxanthine est entiérement hypophasique.
`Le sel de potassium bleu obtenu par action de la potasse it 1’abri
`de l’air est caractéristique de Pastaxanthine. En presence d’oxygéne,
`la couleur Vire instantanément au rouge par transformation en
`astacine. Cette propriété permet Pidentification de l’astaXanthine.
`En solution dans un mélange 5 1 :4 de benzol et d’éther de
`pétrole, l’astaxanthine est adsorbée sur sucre de canne (KUHN et
`SORENSEN) d’ou elle se laisse éluer par le benzol. On peut également
`utiliser l’alumine comme adsorbant, le solvant étant alors l’éther de
`pétrole et l’éluant 1’éther de pétrole additionné de 1 % de méthanol.
`Plusieurs esters de l’astaxanthine ont été obtenus par synthése
`partielle : KUHN et SORENSEN ont préparé le diacétate, le dicapry-
`late et le dipalmitate, ce dernier ayant été isolé de Phypoderrne du
`homard par KARRER, LCEWE et HUBNER (41) et d’abord considéré
`comme un dipalmitate d’astacine. Le monopalmitate d’astaxanthine
`a aussi été préparé par KUHN, STENE et SORENSEN (49).
`Seul de tous ces dérivés, l’acétate est hypophasique, les autres sont
`épiphasiques (40).
`
`(1) La glycymérine isolée par FABRE et LEDERER (17) de Pectunculu: glycymeris présente
`un spectre d’absorption trés voisin de celui de 1’astacine mais décalé par rapport 51 celui
`de cette derniére d’une dizaine de mu. vers les courtes Iangueurs d’ondes. La glycymérine
`qui se distingue de l’astacine par Pabsence de caractére acide est de constitution encore
`inconnue.
`EULER et HELSTROM (16) out isolé d’A:1eria rubem un caroténoide a caractére acide
`qu’ils ont dénommé acide astérinique. Celui-ci présente un spectre d'absorption it maxi-
`mum unique (7» = 480 my. dans la pyridine). Mais RI'3BEL (84) a montré qu’il s’identifie
`vraisemblablement
`it 1’astacine.
`Quant a la mytiloxanthine trouvée par SCI-IEER (85) dans le muscle de Mylilu: mlifor—
`
`

`
`CHAPITRE II
`
`_
`
`L’ASTAXANTHINE
`
`DANS LES ORGANISMES VIVANTS
`
`D’abord considérée comme un. caroténoide des animaux, Pasta-
`xanthine a été mise en évidence égalernent chez des végétaux. Dans
`les organismes, 1’astaxanthine se rencontre libre, estérifiée ou liée £1
`une protéine. Dans un certain nombre de cas, d’ailleurs, on n’a pas
`caractérisé 1’as-taxanthine elle-méme mais l’astacine et il n’est pas
`alors possible de dire si celle-ci représente le pigment naturel ou son
`produit d’oxydation.
`D’autre part, on n’a pas jusqu’ici rencontré chez les plantes de
`chromoprotéide du type de Yovoverdine des oeufs de hornard
`[MCKINNEY (S9)].
`Le tableau ci-dessous donne une liste des espéces animales et végé-
`tales of: a été caractérisée Yastaxanthine (ou 1’astacine).
`
`TABLEAU I (1)
`
`Répartition de Fastaxanthine (ou de Pastacine) chez les étres
`vivants.
`
`I.
`
`- ALGUES VERTES
`
`Haematococcus p1uVia1is"‘
`TISCHER (98)].
`
`[KUHN, STENE et: SORENSEN (48),
`
`II.
`
`- PROTOZOAIRES
`
`Euglena heliorubescens ‘*
`
`[TISCHER (97 )].
`
`III. - SPONGIAIRES
`
`Axinella crist:a—gal1i [KARRER et SoLMssEN (44)].
`(1) La majeure partie des documents de ce tableau a été empruntée £1 KUHN, STENE
`et SORENGEN (48). Les organismes oi: Pastaxanthine a été identifiée sans ambiguité sont
`
`

`
`
`
`VI‘.
`
`- ECHINODERMES
`
`2- Décapodes :
`Astacus galnmarus *
`SORENSEN (47) J ;
`Homarus am '
`_
`erlcanus ”' [STERN
`Ma.” squl-nado [K
`Pahnurus vul
`'
`
`et SALO
`
`-
`3
`’
`’PARRY et LOVERN (5)] .
`Potamobms astacus
`[WILLSTAEDT ( 11 1) ] ;
`Aristeomorpha fol'a
`#-
`SONET <25” ;
`1 cea
`IGRANGAU1), CHECHAN, Mu, MAS_
`F-uP3gurus Prideauxii
`[LEDERER (54) ]_
`17) C°PéPodes:
`
`JACKSON
`
`BRON:
`
`Ophidiaster ophidianus [KARRER et BENZ (36)] ;
`Echinaster sepositus [KARRER et SOLMSSEN (44)].
`
`VII.
`
`- TUNICIERS
`
`Dendrodoa grossularia [LEDERER (S 4)] ;
`Halocynthia papillosa [LEDERER (S 4) ].
`
`VIII. - POISSONS
`
`Beryx decadactylus (peau) [LEDERER (52) ] ;
`Carassius auratus (peau) [LEDERER (S 2) ] ;
`Cyclopterus lumpus (foie) [SORENSEN (8 8) ] ;
`L Lophius piscatorius (foie)
`[SORENSEN (87)] ;
`Regalecus glesne '"’ (foie)
`[SORENSEN (87), KUHN, STENE
`et SORENSEN (48)] ;
`Salmo salar (muscle) [SORENSEN (88)] ;
`Salmo trutta * (muscle)
`[SORENSEN et STENE (91)] ;
`Sebastes marinus (peau) [LEDERER (S3)] ;
`Perca fluviatilis (nageoires) [LEDERER (5 3)].
`
`IX. - REPTILES
`
`Clemmys insculpata (rétine) [WALD et ZUSSMAN (109)].
`
`X. - OISEAUX
`
`Phasianus colchicus "‘ [BROCKMANN et VOLKER (4), KUHN,
`STENE et SORENSEN (48)].
`
`XI.
`
`- MAMMIFERES
`
`[ScHMIDT—NIELsEN, So-
`(graisse)
`Balaenoptera musculus
`RENSEN et TRUMPY (86), BURKHARDT, HEILBRON, JACK-
`SON, PARRY et LOVERN (5 ) ].
`
`9) Cirripédes:
`LCPHS fascicularis
`B
`.
`LePas anatifera ‘“" [ [ ALL (1)1 ’
`BALL (1)_]_
`
`2° I1ZS€£‘l‘e5
`
`[GOOD
`Locusta '“
`[GOODWIN et SRISUI({H)(]23’)]
`Schistocerca *
`LePtinotarsa ’*
`[MANUNTA (52) ]_
`
`WIN et SRISUKH 23
`
`.
`
`V. - MOLLUSQUE3
`Lima excavata [50RENs1~:N 03%)].
`
`.
`
`ETUDE DU PIGMENT D’ARISTEOMORPHA FOLIACEA
`
`Aristeomorpba foliacea, Crustacé décapode de la tribu des
`Penaeidae est une grosse crevette rouge foncé péchée en Méditerra-
`née £1 des profondeurs de 2 51 300 métres et au delé. Vendue en quan-
`tités abondantes sur les marchés des ports algériens de juin 5.
`
`

`
`Po
`”
`~
`-
`‘
`encolirélce,eti‘(11‘;1Ie1t§1£11é,Pl}ifLf1:€1:1t)1;qsuS1(,)I)2r1l niliotre connaissance, n’avait pas
`rieurement élaborées P9)ur d’autres es:|séoi:I:Pcl1ee(§i1'eS Eecbnlques antér
`Et LEDERER (45)’ LEDERER (53), KUHN etu§<:1:i~I1s):i~IK(I?7IN
`Ziféiii“-"‘4*" ,
`”
`héD§tto'Pancréas et le Pi§1i§e1r11:n:xIt)1:iStencle dliillis liijiufle extraite dc?
`tapisse intérieurement la carapace et revét la §§’C°hee1:;1)¢:n:c;1lgee qui
`- NCREAS.
`1° PRIZIPARATION
`’
`DE L HUILE n’1—n5:I=ATo PA
`'
`
`Les hé
`-
`'
`pato—pancreas extraits d
`’
`morp/oa sont broyés avec €111 Siifiiphglothzrax de 1 kg_ d>Armce0_
`masse est épuisée par lxacétone (200 elme) so ium aighydre, puis la
`acetonique placée dans une ampoule 51 deg‘: 1t00.cm .). La solution
`d ether de pétmle (50 Cma ) et d,ea
`7
`an3at1on est additionnee
`repos’ 1,éther de pétmle qui a entrri (, 51 Cm Apcires agitation et
`'
`»
`H
`ne a totalté u
`’
`separe, lave a l’eau et séché su
`Pigment est
`.
`r sulfate de soude nh d
`ensu t
`.
`V
`3
`Y 1‘€- 011 chasse
`.1 e le solvant par chauffage au ba1n—marie (sans dé a
`40°
`et distillation sous pression réduite en atmosphér Q:
`1’ Sser
`C)
`On obtient ainsi
`e
`azote‘
`Par kg. de crevettes de 5 ‘ 3
`d»
`.
`.
`est rouge foncé pour les extra
`'
`a
`g'
`une hmle qui
`,
`-
`ctions If
`'
`ofangee et beaucoup moins Concentrzeeetiueies entre mai et octobre,
`t1ons d’octobre 2; mai Les spectres d’abso
`pour 168 extrac-
`°
`g- 1) objectivent
`1'13 ‘On
`ces difiérences
`1‘
`‘
`.
`.
`d>hlver (24).
`q
`1 atives entre les huiles d’ete et
`_
`qua itatives et uant t
`.
`,
`I
`
`Huile d'Aristeamorpha Igumea
`dans la pyridine
`Epaisseuv = I an
`A: huile de Mai c: 27,,
`s ; huule de Fév. c: 29,‘,
`
`2° PREPARATION DE
`JONCTIF PERISTOMACAL.
`
`L’EXTRAIT DE L’HYI-‘ODERME (1) ET DU CON-
`
`face interne des carapaces et le con-
`L’hypoderme qui tapisse la
`jonotif qui_ enveloppe la poche stomacale peuvent étre facilement
`détachés par curetage. L’épuisement £1 l’acétone fournit une liqueur
`rouge que l’on traite par l’eau et l’e'ther de pétrole. Ce dernier est
`séparé, lavé, séché et évaporé comme ci-dessus. L’extrait obtenu est
`beaucoup moins abondant que dans le cas des hépato-pancréas mais
`considérablement plus concentré en pigment.
`
`IDENTIFICATION DU PIGMENT :
`2 grammes d’huile d’hépato-pancreas (extrait de juillet) sont dissous
`dans 200 cm”. d’éther de pétrole.
`La solution est versée lentement et as irée sur une colonne d’alu-
`n
`P
`a
`a
`mine de 20 cm. de haut et de 2 cm. de diamétre. Le pigment est
`retenu it la partie supérieure de la colonne. Aprés développement
`par l’éther de pétrole (200 cm3) on obtient le chromatograrnme
`suivant (2), (3) :
`cm. d’épaisseur)
`(1
`a) zone rose
`cm.
`))
`)
`(0,2
`I7)
`»
`rouge
`cm.
`»
`)
`(1
`c)
`»
`rose
`cm.
`»
`)
`(0,S
`d)
`»
`rouge violacé
`(0,1S cm.
`»
`)
`e)
`»
`jaune orangé
`L’élution est effectuée
`ar :1 itation de l’alumine colorée avec de
`P ,
`g
`l’éther de pétrole additionné de 1 % de rnéthanol, puis le solvant est
`chassé par distillatio
`'
`éduite et en atmosphere inerte.
`Le résidu est alors saponifi
`a 15 % durant
`quatre heures et $1 20° C. Le pigment est ensuite séparé par addi-
`tion d’eau et d’éther de pétrole: aprés séjour £1 la glaciére il se
`rassemble £1 1’interphase sous forme de flocons rouges. Ceux—ci sont
`isolés et purifiés par dissolution dans l’alcool chaud, refroidissement
`et filtration. On dilue avec une solution de carbonate de sodium in
`10 % puis on agite avec de Yéther de pétrole. Le pigment se ras-
`semble de nouveau it la surface de Contact des deux liquides ; on
`le sépare et on poursuit la purification par remise en solution dans
`de sodium. On répéte
`l’alcool suivie de relargage par le carbonate
`__j______
`cré par 1’usage (4.0),
`(48). En réalité le
`(‘) Le terme «d’hypoderme» semble consa
`pigment est localisé dans les chromatophores situés dans le derme.
`(2) Les huiles d’hiver donnent uu chromatogramrne tout
`it fair semblable;
`seules
`semblent vatier les proportions relatives des divers constituants.
`
`

`
`-
`
`trois fois cette suite d’opérations puis on remet les flocons en sus-
`pension dans
`l’alcool
`£1 50 %. Aprés acidification par
`l’acide
`acétique le précipité rouge vire au violet noir. On reprend par
`l’éther de pétrole et on chromatographie sur alumine. Le pigment
`est énergiquement retenu a la partie supérieure de la colonne for-
`mant une zone Violette de 1,5 51 2 mm. seulement d’épaisseur. On
`développe 5. l’éther de pétrole puis on élue avec du méthanol con-
`tenant S % de potasse. Aprés addition d’eau et d’acide acétique, on
`extrait le pigment par le chloroforme; l’évaporation du solvant
`sous pression réduite laisse déposer des cristaux violet noir au sein
`d’une masse amorphe rouge. La masse énorme des
`lipides qui
`accompagnent le pigment dans l’huile d’hépato-pancréas ne nous a
`pas permis de pousser plus avant la purification.
`A partir de l’eXtrait de l’hypoderme ou du conjonctif des poches
`stomacales, il a été par contre possible d’obtenir ce méme pigment
`bien cristallisé : aprés extraction et saponification, le sel de potassium
`séparé est lavé avec un peu d’alcool a 50 % puis d’éther de pétrole,
`remis en suspension dans l’alcool aqueuxpet acidifié par l’acide acé-
`tique : les flocons rouges se transforment en une masse violet noir.‘
`On sépare celle-ci, et fait recristalliser le pigment a partir de la
`pyridine aqueuse.
`Le caractére acide du pigment, son comportement vis-a-vis de
`la potasse et de l’éther de pétrole, l’aspect des cristaux, leur solubi-
`lité dans la pyridine (solution rouge sang), dans l’acide sulfurique
`concentré (coloration bleu foncé), dans le chloroforme (solution
`rouge orangé donnant une coloration bleu vert avec le réactif au
`trichlorure d’antimoine) permettent d’identifier
`le caroténoide
`isolé 5 l’astacine. Ce fait est confirmé par la détermination du point
`de fusion (228° C) et le spectre d’absorption 5 bande large et a
`maximum unique (). = 500 mu dans la pyridine).
`Il était vraisemblable d’ailleurs que le pigment naturel était, non
`l’astacine elle—méme, mais, comme chez le Homard, l’astaxantl1ine
`sous forme d’esters. Effectivement,
`l’extrait de l’hypoderme des
`carapaces remis en solution dans la pyridine fournit un spectre
`d’absorption caractéristique des esters de l’astaxanthine avec son
`maximum Ta 490 mg (25) (fig. II) (1).
`
`(1) Une tentative d’isolement du pigment dc I’huile par condensation avec le réactif
`«T» de GERARD et SANDULESCO n’a pas été couronnée de succes. Ce résultat négatif a été
`confirmé au Laboratoire de Chimie Biologique de la Faculté des Sciences de Lyon par
`M. MALLEIN, que nous tenons 52 remercier ici.
`L’incapacité du pigment a se condenser avec le réactif «T» semble indiquer Pabsence
`de fonctions cétoniques libres et Yhypothése qui parait actuellement la plus vraisemblable
`
`la diflérence des chromato-
`£1 1’huile d’hépato-pancréas,
`Quant
`tre également que son
`.
`-
`‘
`t et a res saponification mor_1
`.
`.
`grammes “an 1 n’e§t Pas non plus l’astacine mais quill Se trans’
`ture
`'
`.
`1
`Pigment na
`'
`d
`érations d’isolement. Pourtant
`e
`forme en celle—ci au cours
`es OP
`x
`,
`,
`‘
`‘tué non a
`d’he ato— ancreas a son maximum si ‘
`’
`'
`spectre de lhlgliiians leEcas (15 pigment d’hYP°derme ma“ 3‘ 484 mp”
`490 mu Comm
`,
`‘
`lateau entre
`lus étale est pratiquement 611 P
`.
`En outre, le sommet p
`_
`,
`_
`d
`1
`.eurS Constk
`'
`entir lexistence e p usi
`_
`'
`.
`.
`480 et 490 mil»: Cg C1uLfa;3p::)::amme formé de Cinq Zones md1v1_
`tuants. L’aspect u C 170
`’
`.
`.
`h
`thése
`.
`,
`" e
`firmation a cette ypo
`-
`dualisees, apporte une Premler Con
`
`Ch c ne des zones du chromatogramme a été Sépafée 3‘ 119 Pig‘
`3 u
`.
`.
`~
`’
`’ét er
`ment a été élué par agitation de l’alumine coloree avec de
`I
`‘
`'
`'
`du
`,
`.
`.
`,
`th ol. A res evaporation
`del petrole additioiilne (i1Iele1lt;7oetcl1ee$iese :11 solutilzm dans la pyridine’
`so vant en atmosp ere
`les spectres de chaque fraction ont été enregistrés (7).
`Chimie
`'
`-
`r
`.
`,
`'
`’
`’
`isti-es au laboratoii-e de
`(1) Ce spectre ct cell“ repregeilte figurle l.I}ioiiin;re£i:ee1£irl’§imabilité de MM. JOUANNETEAU
`
`

`
`rents caractérisés par des maxima d’absorption distincts situés res-
`pectivement vers 470, 482 et 490 mu. Cependant
`la similitude
`d’al1ure des différentes courbes et le fait que tous ces constituants
`se transforment en astacine par autoxydation, montrent qu’il ne
`peut s’agir que de substances trés voisines. On doit méme se deman-
`der en premier lieu si l’adsorption a divers niveaux de la colonne
`d’a1umine des différentes substances lipidiques n’est pas la raison de
`cette hétérogénéité apparente du chromatogramme et si ces sub-
`stances lipidiques éluées en méme temps que le pigment de chacune
`des zones ne sont pas responsables d’un déplacement du spectre.
`Cette interprétation ne semble pourtant pas devoir étre retenue ;
`en effet 1’addition de 10 % d’huile de ricin a chacun des éluats ne
`produit aucun décalage appreciable des maxima, seule la densité
`optique subit une diminution générale.
`La présence d’un mélange de plusieurs esters d’un méme pigment
`ne saurait pas davantage rendre compte d’écarts aussi importants
`entre les sommets des différentes courbes.
`
`L’éventualité de l’existence de plusieurs pigments, chimiquement
`. différents, mais de constitution assez proche cependant pour expli-
`quer leur commune oxydation en astacine doit également étre exa-
`minée. Mais cette oxydabilité implique sans doute la présence de
`groupements —CH—-CO— dans la molécule, ce qui conduit
`
`|O
`
`H
`la présence a c6té de l’astaxanthine d’isoméres de
`'21 envisager
`position, 1e composé possédant la structure du 4,4’-dihydroxy-3,35
`dicéto-B—caroténe entre autres.
`
`Sans qu’il soit actuellement possible d’écarter de fagon certaine
`cette interprétation, les récents progrés sur la structure des caroté-
`noides suggérent une hypothése plus séduisante: celle de la pré— -
`sence dans 1’huile d’hépato-pancréas de plusieurs stéréoisoméres de
`1’astaxanthine ou de ses esters. La possibilité d’existence d’un meme
`pigment sous plusieurs formes stéréoisoméres (isoméres cis—trans.)
`est un fait indiscutablement établi pour plusieurs ca-roténoides et
`l’on sait aujourd’hui que dans la série des provitamines A la confi-
`guration stérique ne Va pas sans influencer quantitativement l’acti-
`Vité biologique (11 3 ) , (114).
`Le tableau ci—dessous donne la liste des caroténoi-des pour lesquels
`l’existence de plusieurs stéréoisoméres a été reconnue et étudiée :
`
`e d
`
`9
`
`e ce e
`
`e c et
`
`
`
`
`
`Pi9ment d'hypodeyme_
`Réuction de CARR et PRICE
`
`3 mu. Pour la zone c, le 5
`ommeta mieux défini,
`.
`,
`se situe in 482 m
`I
`H, quant a la fraction d -
`sommet en plateau de 480 x
`2 5011 Spectre presente un
`_
`8
`In C
`,-
`,
`.
`‘
`\
`I
`,
`ne1te_;
`11 est vraisemblable quaeue :3‘: efgrui suggere son heteroge’_
`constituant predominant da
`mee par le melange du
`jgoconstituant caractérisé daIr11:i?hf'1pa(f<i:<i:'r1i1¢:‘d(e:1 max : 482 mil) et
`.
`'
`r
`-
`a zone
`my‘) ' E“ C9 qui concerne I
`'
`S campaces (1 max =
`e, sa faible epaisseur (0,1 5 cm.)
`11 3 Pas permis de l’isoler sans entrainer
`; sa constitution parait intermédiaire eaiivteic eflil ug Peu Cl; la Zone
`
`

`
`TLABLEAU II
`
`aicamténe [GILI-AM; EL RIDI et KO
`(21), ZECHMEISTER et coll.
`(115), ZSCHEILE et coll. (116)] N
`Capsanthme [ZECHMEISTER et coll
`(113 )]
`et coll. (115)],
`EISTER et C011‘ (115)1-
`S
`Xantho h ll
`P Y e [ TRAIN (95), ZECHMEISTER et coll. (l15)].
`Zéaxanthine [ZEcHMI=.1sTER et coll
`(115)]
`Physaliéne [ZECHMEISTER et coll. (11;) ]
`
`ZECHMEISTER (73 ) ]_
`y-Carotene [HUNTER t S
`Pm_Y_Caroténe [ZEC}:MEICs<::I1; (e.:4C)(,)HZECHMEISTER et coll. (115)].
`Celaxanthine [LE ROSEN et ZEcHMEIsT(§11 ig
`R
`n
`Fucoxanthine [ST
`P1‘01YCopéne [ZECI:-IA]:/I1\]I3I::‘§Il£AeI:1\::I()1\lI1G
`l
`
`e
`
`hstaxanth. mes steréoisoméres n’a pas éte’
`.
`I
`111?. Pour pouvolr affirmer de
`pigment des huiles d’Aristeomorpha présente
`la séried
`'
`--
`.
`.
`-
`.
`>
`.
`,
`11 fdudrait reusslr la conversion dzune forme
`CS carotenoldes
`dansl autre. Cependant,
`les dlfierents moyens
`.
`.
`utilisés pour d’autr
`..
`.
`,
`1,10de, de la Iumiére’ ébullition ‘
`es carotenoides, action de
`
`le pigment caroténoide essentiel d’Aristeomorpha
`En résumé,
`foliacea est Yastaxanthine. Nous l’avons, en effet,
`identifiée sans
`ambiguité dans l’hypoderme des carapaces et Ie conjonctif péristo—
`macal. Elle est également présente dam l’huile d’hépato-pancréas,
`accompagnée de formes voisines qui sont vraisemblablernent des
`stéréoisoméres de la configuration entiérernent trans.
`Il était intéressant de rechercher, chez Aristeomorpha, £1 c6té de
`Pastaxanthine, la présence éventuelle dl’axérophtol et de caroténes.
`Chez les Crustacés, en efiet, tandis que la vitamine A n’est généra—
`lernent pas décelable, les caroténes sont au contraire souvent présents
`mais a l’état de traces : LEDERER (5 4), chez Calanus finrnarchicus,
`petit Copépode des mers du Nord, n’a pu caractériser l’axérophtol
`et a trouvé une teneur en caroténes de 0,4 mg. seulement pour
`500 g. d’animauX.
`Avec CHECHAN, M” MASSONET em: ODIER (26), CHECHAN et
`Mm’ MASSONET (25), nous avons effectué chez Aristeomorpha la
`recherche de ces facteurs, aussi bien clans l’huile d’hépato-pancréas
`que dans l’hypoderme des carapaces, en utilisant la technique spec-
`tro-photométrique et la réaction de CARR et _PRIcE. Les résultats
`obtenus peuvent se résumer de la fagon suivante :
`
`En ce qui concerne la vitamine A :
`
`1° Les déterminations spectrophotométriques dans l’ultra-violet
`n’ont en aucun cas révélé les plus petites quantités dfaxérophtol;
`2° La réaction de CARR et PRICE, rnoins spécifique mais plus sen-
`sible que la spectrophotométrie, exécutée sur les insaponifiables,
`a confirmé les résultats précédents.
`
`Quant aux caroténes, la chromatographic sur alumine des divers
`extraits n’a permis de mettre en évidence aucun autre pigment que
`ceux des cinq zones décrites ci-dessus et le spectre dans le visible de
`ces zones examinées séparément ou globalement ne révéle pas trace
`du systéme a trois maxima caractéristique des caroténes.
`La conclusion qui se dégage de l’e.nsemble des mesures effectuées
`par spectrophotométrie et a l’aide de la ré